Parametri misurabili di citometria a flusso

Il fatto che la citometria a flusso permette alla misura simultanea dei parametri cellulari multipli è uno degli aspetti più potenti di questa tecnologia. La tecnica ha una vasta gamma di applicazioni compreso l'identificazione degli antigeni all'interno di o sulla superficie di una cella, l'analisi del RNA e del DNA ed una serie di altri usi di potenziale. Alcuni esempi dei parametri che possono essere valutati facendo uso di citometria a flusso sono descritti qui sotto.

Analisi funzionale

La citometria a flusso può essere usata per valutare i cambiamenti che si presentano in celle su un corto periodo di tempo. Attività biologiche quale variazione nel contenuto del calcio in risposta alle droghe; la generazione di specie reattive dell'ossigeno o di cambiamenti mitocondriali della membrana durante le tariffe della fagocitosi e di apoptosis facendo uso dei batteri contrassegnati, può tutti essere valutata facendo uso di citometria a flusso.

Attuabilità

Una tintura dell'associazione del DNA può aggiungersi ad una popolazione delle cellule per valutare l'attuabilità delle cellule dopo l'introduzione di un organismo patogeno. Quando l'integrità della membrana di plasma è compromessa, una cella diventa necrotica e che permette che le tinture di attuabilità la entrino. Le celle morte possono ora essere identificate al più presto o le fasi recenti di necrosi facendo uso di un intervallo delle tinture di attuabilità, della quantificazione del DNA e through misurando lo spargimento laterale della membrana sondano Banca dei Regolamenti Internazionali-oxonal.

Apoptosis

L'autodistruzione di una cella come istruita dai geni si riferisce a come apoptosis. La citometria a flusso può essere usata per individuare i cambiamenti morfologici e biochimici caratteristici che si presentano durante il apoptosis. Gli esempi dei cambiamenti morfologici comprendono i cambiamenti nella forma delle cellule, nella perdita di strutture sulla superficie delle cellule, nella separazione delle cellule, nella condensazione del citoplasma, nel restringimento delle cellule, nella fagocitosi dei residui cellulari e nei cambiamenti nella busta nucleare. Alcuni esempi dei cambiamenti biochimici comprendono la proteolisi, la denaturazione del DNA, la disidratazione delle cellule, la proteina checollegano e un aumento negli ioni liberi del calcio.

Necrosi

Le misure di necrosi possono essere derivate dai trattamenti della fagocitosi di oncosis, di apoptosis e di auto. Oncosis si riferisce alla necrosi come risultato di un evento che induce la cella a gonfiare piuttosto che si restringe (come accade nel apoptosis). Durante il oncosis, la cella e gli organelli dentro rigonfiamento. La membrana di plasma finalmente si rompe ed è seguita dalla fase necrotica in cui la cella rilascia gli enzimi proteolitici che danneggiano il tessuto circostante. La cella restringe (il apoptosis) ed i cambiamenti si presentano nel potenziale mitocondriale del transmembrane e della struttura. La cromatina egualmente condensa.

Analisi del ciclo cellulare

La proliferazione cellulare può essere valutata misurando le fasi differenti del ciclo cellulare in una popolazione delle celle. Il contenuto del DNA varia con ogni fase del ciclo cellulare e questo può essere valutato facendo uso delle tinture fluorescenti dell'associazione del DNA e degli anticorpi monoclonali per individuare l'espressione degli antigeni. Poichè l'istone H3 subisce la fosforilazione fra il prophase e l'anafase, questa proteina può essere usata per distinguere fra G2 e le fasi di m. quando valuta il ciclo cellulare.

Alcuni altri esempi dei parametri che possono essere valutati facendo uso di citometria a flusso sono elencati qui sotto:

  • Misura dei pigmenti delle cellule quali clorofilla o la ficoeritrina
  • Misura della variazione di numero di copia del DNA facendo uso del Flusso-PESCE (ibridazione in situ fluorescente) o della tecnologia delle BACs-su-Perle
  • Misura degli antigeni intracellulari quali le citochine o i mediatori secondari
  • Misura di attività enzimatica
  • Misura del burst ossidativo
  • Rilevazione di glutatione
  • Misura di aderenza delle cellule

Sorgenti

  1. www2.massgeneral.org/aids/flow_cytometry/documents/IntrotoFlow.pdf
  2. http://crl.berkeley.edu/IntroductionWeb.pdf
  3. http://facs.scripps.edu/BRJIM.pdf
  4. www.biozentrum.unibas.ch/.../Introduction_to_Flow_Cytometry-2012.pdf
  5. files.nyu.edu/.../introduction.pdf
  6. http://www.icms.qmul.ac.uk/flowcytometry/uses/viability/index.html
  7. http://www.medicine.virginia.edu/research/cores/FlowCytometry/training/document-files/Intro-to-Flow-Cytometry-notes.pdf
  8. http://cytometry.arl.arizona.edu/content/capabilities-and-applications
  9. http://www.bioinformin.net/cytometry.php
  10. http://bitesizebio.com/13695/basic-measurements-of-flow-cytometer-forward-side-scatter-quantitative-flow-cytometry/

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Last Updated: Aug 23, 2018

Sally Robertson

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Sally Robertson

Sally has a Bachelor's Degree in Biomedical Sciences (B.Sc.). She is a specialist in reviewing and summarising the latest findings across all areas of medicine covered in major, high-impact, world-leading international medical journals, international press conferences and bulletins from governmental agencies and regulatory bodies. At News-Medical, Sally generates daily news features, life science articles and interview coverage.

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