Parâmetros mensuráveis do Cytometry de fluxo

O facto de que o cytometry de fluxo permite a medida simultânea de parâmetros celulares múltiplos é um dos aspectos os mais poderosos desta tecnologia. A técnica tem uma vasta gama de aplicações que incluem a identificação dos antígenos dentro ou na superfície de uma pilha, análise do ADN e do RNA e um número outros de usos do potencial. Alguns exemplos dos parâmetros que podem ser avaliados usando o cytometry de fluxo são descritos abaixo.

Análise funcional

O cytometry de fluxo pode ser usado para avaliar as mudanças que ocorrem nas pilhas durante um curto período de tempo. Actividades biológicas tais como a variação no índice do cálcio em resposta às drogas; a geração de espécie reactiva do oxigênio ou de mudanças mitocondriais da membrana durante taxas do apoptosis e da fagocitose usando as bactérias etiquetadas, pode tudo ser avaliada usando o cytometry de fluxo.

Viabilidade

Uma tintura do emperramento do ADN pode ser adicionada a uma população da pilha para avaliar a viabilidade da pilha após a introdução de um organismo patogénico. Quando a integridade da membrana de plasma é comprometida, uma pilha torna-se necrotic e permite-se que as tinturas da viabilidade entrem n. As pilhas inoperantes podem agora ser identificadas no adiantado ou as fases atrasadas da necrose usando uma escala de tinturas da viabilidade, de quantificação do ADN e com da medição do scatter lateral da membrana sondam o Bis-oxonal.

Apoptosis

A auto-destruição de uma pilha como instruída por genes é referida como o apoptosis. O cytometry de fluxo pode ser usado para detectar as mudanças morfológicas e bioquímicas características que ocorrem durante o apoptosis. Os exemplos de mudanças morfológicas incluem mudanças na forma da pilha, na perda de estruturas na superfície da pilha, no destacamento da pilha, na condensação do citoplasma, no encolhimento da pilha, na fagocitose de resíduos celulares e nas mudanças no envelope nuclear. Alguns exemplos de mudanças bioquímicas incluem o proteolysis, a desnaturação do ADN, a desidratação da pilha, a proteína queligam, e uma elevação nos íons livres do cálcio.

Necrose

As medidas da necrose podem ser derivadas dos processos da fagocitose do oncosis, do apoptosis e do auto. Oncosis refere a necrose como consequência de um evento que faça com que a pilha inche um pouco do que encolhe (como ocorre no apoptosis). Durante o oncosis, a pilha e os organelles para dentro ele inchamento. A membrana de plasma rompe e é seguida eventualmente pela fase necrotic onde a pilha libera as enzimas proteolytic que danificam tecido circunvizinho. A pilha encolhe (o apoptosis) e as mudanças ocorrem no potencial mitocondrial da estrutura e da transmembrana. A cromatina igualmente condensa-se.

Análise do ciclo de pilha

A proliferação celular pode ser avaliada medindo as fases diferentes do ciclo de pilha em uma população das pilhas. O índice do ADN varia com cada fase do ciclo de pilha e este pode ser avaliado usando tinturas fluorescentes do emperramento do ADN e anticorpos monoclonais para detectar a expressão dos antígenos. Porque o histone H3 se submete à fosforilação entre o prophase e a anafase, esta proteína pode ser usada para distinguir entre o G2 e as fases de m ao avaliar o ciclo de pilha.

Alguns outros exemplos dos parâmetros que podem ser avaliados usando o cytometry de fluxo estão listados abaixo:

  • Medida de pigmentos da pilha tais como a clorofila ou o phycoerythrin
  • Medida da variação do número de cópia do ADN usando Fluxo-PEIXES (hibridação in situ fluorescente) ou tecnologia dos BACs-em-Grânulos
  • Medida de antígenos intracelulares tais como cytokines ou mediadores secundários
  • Medida da actividade enzimático
  • Medida da explosão oxidativo
  • Detecção de glutatione
  • Medida da aderência da pilha

Fontes

  1. www2.massgeneral.org/aids/flow_cytometry/documents/IntrotoFlow.pdf
  2. http://crl.berkeley.edu/IntroductionWeb.pdf
  3. http://facs.scripps.edu/BRJIM.pdf
  4. www.biozentrum.unibas.ch/.../Introduction_to_Flow_Cytometry-2012.pdf
  5. files.nyu.edu/.../introduction.pdf
  6. http://www.icms.qmul.ac.uk/flowcytometry/uses/viability/index.html
  7. http://www.medicine.virginia.edu/research/cores/FlowCytometry/training/document-files/Intro-to-Flow-Cytometry-notes.pdf
  8. http://cytometry.arl.arizona.edu/content/capabilities-and-applications
  9. http://www.bioinformin.net/cytometry.php
  10. http://bitesizebio.com/13695/basic-measurements-of-flow-cytometer-forward-side-scatter-quantitative-flow-cytometry/

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Last Updated: Aug 23, 2018

Sally Robertson

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Sally Robertson

Sally has a Bachelor's Degree in Biomedical Sciences (B.Sc.). She is a specialist in reviewing and summarising the latest findings across all areas of medicine covered in major, high-impact, world-leading international medical journals, international press conferences and bulletins from governmental agencies and regulatory bodies. At News-Medical, Sally generates daily news features, life science articles and interview coverage.

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