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Techniques de cytométrie de flux utilisées dans le médicament et la recherche

La cytométrie de flux est une technique utile pour l'analyse de grandes populations des cellules. Cet article décrit la combinaison de la cytométrie de flux avec d'autres techniques (telles que la cellule triant) et les applications de ces techniques dans le médicament et la recherche.

Cet article couvrira :

La cytométrie de flux peut être employée pour analyser des prises de sang. Cette image montre la variété de cellules qui sont présentes dans le flot de sang humain.SebastiAn Kaulitzki | Shutterstock

trier Fluorescence-activé de cellules (FACS)

trier et cytométrie de flux (FACS) Fluorescence-activées de cellules sont employés souvent en tant que conditions interchangeables. Cependant, FACS est une méthode spécialisée de cytométrie de flux qui aide à trier matériel un mélange de cellules dans différentes populations.

Premièrement, un anticorps qui est spécifique à une protéine de surface de cellules est étiqueté avec une molécule fluorescente et ajouté à la population des cellules. Puis, pendant que les cellules traversent la lumière laser, une électrode actuelle dans la machine de FACS impose une charge électrique à chaque cellule basée en circuit si la cellule est fluorescente ou non fluorescente. Par la suite, des électro-aimants sont utilisés pour trier les cellules dans différents récipients basés sur leurs différences de charge. Cette méthode peut être employée pour déterminer des paramètres variés, tels que la teneur en ARN et en ADN d'une cellule.

Compteurs Coulter

Un compteur Coulter est un dispositif qui est utilisé pour compter et classer les particules suspendues. Cette méthode de comptage peut être employée pour des cellules, des bactéries, des cellules procaryotiques, des virus, etc. Cette méthode est venue pour être identifiée comme méthode de référence pour analyser la dimension particulaire et les particules.

La méthode de coutre est basée sur les changements de mesure de l'impédance électrique qui est produite par les particules qui sont non-conductrices et est suspendue dans l'électrolyte. L'impédance est l'opposition actuelle dans un circuit au courant quand une tension est appliquée, assimilé à la résistance trouvée dans le C.C circuite.

La riposte se compose de deux chambres qui contiennent des solutions d'électrolyte séparées par un microcanal. Le liquide avec les particules ou des cellules sont entraînés dans le microcanal. Pendant que la particule ou la cellule déménage par le microcanal, il déplace son volume d'électrolyte. Ce volume déplacé est trouvé comme impulsion de tension où la hauteur du pouls est proportionnelle au volume de cellules.

Choix de talon de cytométrique

Le choix de talon de cytométrique est une application de cytométrie de flux où les usagers peuvent simultanément mesurer les protéines multiples. Une suite de talons minuscules qui ont des intensités discrètes de fluorescence est employée pour trouver les analytes solubles multiples des échantillons, tels qu'un sérum, un plasma, ou des échantillons uniques de surnageant de culture de tissu.

Les talons spécifiques sont mélangés à des anticorps phycoérythrine-conjugués de dépistage et incubés avec des échantillons, formant des composés de sandwich. Cette méthode emploie la sensibilité du dépistage de fluorescence par cytométrie de flux pour mesurer les paramètres des analytes solubles utilisant un immunoessai.

Applications de cytométrie de flux dans le médicament et la recherche

Il y a de nombreuses applications de cytométrie de flux, telles que le dépistage et la mesure de l'expression de la protéine et des modifications goujon-de translation, y compris les protéines fendues et phosphorylées. Immunotyping est une autre application, où des anticorps fluorescence-conjugués sont employés pour trouver les protéines spécifiques sur la surface des cellules. Ceci peut également être employé pour déterminer le rendement de transfection d'exprimer un gène à l'aide d'une borne, telle que le GFP.

La présence des antigènes spécifiques est également employée pour diagnostiquer des leucémies aiguës, des maladies lymphoproliferative continuelles, et des lymphomes malins. Plusieurs méthodes de cytométrique sont employées pour trouver la mort cellulaire et la nécrose programmées au cours d'une expérience, ou pendant les conditions malades. L'intensité de fluorescence de l'ADN est employée pendant la cytométrie de flux pour déterminer la quantité d'ADN cellulaire et de progression du cycle cellulaire.

Tout en employant des antibiotiques, cette méthode peut être employée pour déterminer le régime de la mort bactérienne. Par exemple, les cellules sous tension se composent des membranes intactes et sont ainsi imperméables aux teintures comme l'iodure de propidium. Dans le cas de la mort cellulaire, l'intégrité de la membrane cellulaire est franchie, menant à la teinture coulant dans la cellule. Ceci aide trouvent à rapidement et sûrement les cellules sous tension et mortes.

La cytométrie de flux est également employée pour mesurer les modifications biologiques se produisant à l'intérieur des cellules au-dessus des durées de courte durée. Celles-ci comprennent des changements de teneur en calcium en présence des médicaments et des agonistes, des modifications de potentiel de membrane, et des niveaux d'espèces réactives de l'oxygène pendant la mort cellulaire.

Sources :

Further Reading

Last Updated: Jun 28, 2019

Dr. Surat P

Written by

Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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