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Tecniche di citometria a flusso utilizzate nella medicina e nella ricerca

La citometria a flusso è una tecnica utile per l'analisi di grandi popolazioni delle celle. Questo articolo descrive la combinazione di citometria a flusso con altre tecniche (quale la cella che ordina) e le applicazioni di queste tecniche nella medicina e nella ricerca.

Questo articolo coprirà:

La citometria a flusso può essere usata per analizzare i campioni di sangue. Questa immagine mostra la varietà di celle che sono presenti nella circolazione sanguigna umano.Sebastian Kaulitzki | Shutterstock

ordinamento Fluorescenza-attivato delle cellule (FACS)

l'ordinamento e la citometria a flusso (FACS) Fluorescenza-attivati delle cellule sono usati spesso come termini intercambiabili. Tuttavia, FACS è un metodo specializzato di citometria a flusso che contribuisce ad ordinare fisicamente una miscela delle cellule nelle popolazioni differenti.

In primo luogo, un anticorpo che è specifico ad una proteina della superficie delle cellule è etichettato con una molecola fluorescente e si aggiunge alla popolazione delle celle. Poi, mentre le celle attraversano la luce laser, un elettrodo presente nel commputer di FACS impone una carica elettrica ad ogni cella basata sopra se la cella è fluorescente o non fluorescente. Successivamente, gli elettromagneti sono impiegati per ordinare le celle nelle imbarcazioni differenti basate sulle loro differenze della tassa. Questo metodo può essere usato per determinare i vari parametri, quale il contenuto nel DNA e nel RNA di una cella.

Contatori Coulter

Un contatore Coulter è un'unità che è utilizzata per contare e graduare le particelle secondo la misura sospese. Questo metodo di conteggio può essere usato per le celle, i batteri, le celle prokaryotic, i virus, ecc. Questo metodo è venuto ad essere riconosciuto come il metodo di riferimento per analizzare la dimensione ed il particolato delle particelle.

Il metodo del coltro è basato sui cambiamenti di misurazione nell'impedenza elettrica che è generata dalle particelle che sono non conduttive ed è sospesa nell'elettrolito. L'impedenza è l'opposizione presente in un circuito alla corrente quando una tensione è applicata, simile alla resistenza trovata nella CC gira intorno a.

Il contatore consiste di due camere che contengono le soluzioni dell'elettrolito separate da un microchannel. Il liquido con le particelle o le celle è trascinata il microchannel. Mentre la particella o la cella si muove attraverso il microchannel, sposta il suo volume di elettrolito. Questo volume spostato è individuato come impulso di tensione dove l'altezza dell'impulso è proporzionale al volume delle cellule.

Schiera Cytometric della perla

La schiera cytometric della perla è un'applicazione di citometria a flusso dove gli utenti possono quantificare simultaneamente le proteine multiple. Una serie di perle minuscole che hanno intensità discrete della fluorescenza è usata per individuare gli analiti solubili multipli dai campioni, quali un singoli siero, plasma, o campioni del galleggiante della cultura del tessuto.

Le perle specifiche sono miste con gli anticorpi ficoeritrina-coniugati di rilevazione e sono incubate con i campioni, formanti i complessi del panino. Questo metodo usa la sensibilità di rilevazione della fluorescenza da citometria a flusso per misurare i parametri degli analiti solubili facendo uso di un immunoassay.

Applicazioni di citometria a flusso nella medicina e nella ricerca

Ci sono le numerose applicazioni di citometria a flusso, quali la rilevazione e la misura dell'espressione della proteina e delle modifiche post-di traduzione, compreso le proteine fendute e fosforilate. Immunotyping è un'altra applicazione, dove gli anticorpi fluorescenza-coniugati sono usati per individuare le proteine specifiche sulla superficie delle celle. Ciò può anche essere usata per determinare il risparmio di temi di transfezione di espressione del gene usando un indicatore, quale GFP.

La presenza di antigeni specifici egualmente è usata per diagnosticare le leucemie acute, le malattie croniche di linfoproliferativo ed i linfomi maligni. Parecchi metodi cytometric sono usati per individuare la morte delle cellule e la necrosi programmate nel corso di un esperimento, o durante gli stati malati. L'intensità della fluorescenza di DNA è usata durante la citometria a flusso per determinare la quantità di progressione cellulare del ciclo cellulare e del DNA.

Mentre usando gli antibiotici, questo metodo può essere usato per determinare la tariffa della morte batterica. Per esempio, le celle in tensione consistono delle membrane intatte e così sono impermeabili alle tinture come lo ioduro di propidium. Nel caso della morte delle cellule, l'integrità della membrana cellulare è violata, piombo alla tintura che cola nella cella. Ciò aiuta a rapido ed attendibilmente individua le celle in tensione e morte.

La citometria a flusso egualmente è usata per misurare i cambiamenti biologici che accadono dentro le celle col tempo le durate di periodo ridotto. Questi comprendono i cambiamenti nel contenuto del calcio in presenza delle droghe ed agonisti, cambiamenti di potenziale di membrana e livelli reattivi di specie dell'ossigeno durante la morte delle cellule.

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Last Updated: Jun 28, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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