Técnicas del Cytometry de flujo usadas en remedio y la investigación

El cytometry de flujo es una técnica útil para el análisis de poblaciones grandes de células. Este artículo describe la combinación del cytometry de flujo con otras técnicas (tales como célula clasificación) y los usos de estas técnicas en remedio y la investigación.

Este artículo revestirá:

El cytometry de flujo se puede utilizar para analizar muestras de sangre. Esta imagen muestra la variedad de células que estén presentes en la corriente de la sangre humana.Sebastian Kaulitzki | Shutterstock

clasificación Fluorescencia-activada de la célula (FACS)

el cytometry de la célula de la clasificación (FACS) Fluorescencia-activada y de flujo es de uso frecuente como términos permutables. Sin embargo, FACS es un método especializado de cytometry de flujo que ayuda a clasificación físicamente una mezcla de la célula en diversas poblaciones.

En primer lugar, un anticuerpo que es específico a una proteína de la superficie de la célula se marca con etiqueta con una molécula fluorescente y se agrega a la población de células. Entonces, como las células pasan a través de la luz laser, un electrodo presente en la máquina de FACS impone una carga eléctrica ante cada célula basada conectado si la célula es fluorescente o no fluorescente. Posteriormente, los electroimanes se emplean para clasificación las células en diversos buques basados en sus diferencias de la carga. Este método se puede utilizar para determinar diversos parámetros, tales como contenido del ARN y de la DNA de una célula.

Contratirantes de cuchilla

Un contratirante de cuchilla es un dispositivo que se utiliza para contar y para clasificar partículas suspendidas. Este método que cuenta se puede utilizar para las células, las bacterias, las células procarióticas, los virus, el etc. Este método ha venido ser reconocido como el método de referencia para analizar talla y la materia en partículas de partícula.

El método de la cuchilla se basa en cambios de medición en la impedancia eléctrica que es generada por las partículas que son no-conductoras y suspendida en el electrólito. La impedancia es la oposición presente en un circuito a la corriente cuando un voltaje es aplicado, similar a la resistencia encontrada en DC circula.

El contratirante consiste en dos cámaras que contengan las soluciones del electrólito separadas por un microcanal. El líquido junto con las partículas o las células se drena dentro del microcanal. Mientras que la partícula o la célula se mueve a través del microcanal, disloca su volumen de electrólito. Este volumen dislocado se descubre como pulso de voltaje donde está proporcional la altura del pulso al volumen de la célula.

Arsenal Cytometric de la moldura

El arsenal cytometric de la moldura es un uso del cytometry de flujo donde los utilizadores pueden cuantificar simultáneamente las proteínas múltiples. Una serie de molduras minúsculas que tengan intensidades discretas de la fluorescencia se utiliza para descubrir los analitos solubles múltiples de muestras, tales como un única suero, plasma, o muestras del sobrenadante de la cultura del tejido.

Las molduras específicas se mezclan con los anticuerpos ficoeritrina-conjugados de la detección y se incuban con las muestras, formando complejos del bocadillo. Este método utiliza la sensibilidad de la detección de la fluorescencia por cytometry de flujo para medir los parámetros de analitos solubles usando un immunoensayo.

Usos del cytometry de flujo en remedio y la investigación

Hay usos numerosos del cytometry de flujo, tal como la detección y la medición de la expresión de la proteína y de modificaciones poste-de translación, incluyendo las proteínas hendidas y phosphorylated. Immunotyping es otro uso, donde los anticuerpos fluorescencia-conjugados se utilizan para descubrir las proteínas específicas en la superficie de células. Esto se puede también utilizar para determinar la eficiencia de la transfección de expresar un gen usando un marcador, tal como GFP.

La presencia de antígenos específicos también se utiliza para diagnosticar leucemias agudas, enfermedades lymphoproliferative crónicas, y linfomas malos. Varios métodos cytometric se utilizan para descubrir muerte celular y necrosis programadas a lo largo de un experimento, o durante estados enfermos. La intensidad de la fluorescencia de la DNA se utiliza durante cytometry de flujo para determinar la cantidad de progresión celular del ciclo celular de la DNA y.

Mientras que usa los antibióticos, este método se puede utilizar para determinar el índice de muerte bacteriana. Por ejemplo, las células vivas consisten en las membranas intactas y son así impermeables a los tintes como el yoduro del propidium. En el caso de muerte celular, la integridad de la membrana celular se abre brecha, llevando al tinte que se escapa en la célula. Esto ayuda descubre a rápidamente y seguro las células vivas y muertas.

El cytometry de flujo también se utiliza para medir los cambios biológicos que ocurren dentro de las células sobre duraciones del breve periodo de tiempo. Éstos incluyen cambios en contenido del calcio en presencia de las drogas y de los agonistas, cambios potenciales de la membrana, y niveles reactivos de la especie del oxígeno durante muerte celular.

Fuentes:

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Last Updated: Jun 28, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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