Cytométrie de flux contre la microscopie à fluorescence

La microscopie à fluorescence et la cytométrie de flux sont des outils de bioanalysis utilisés pour mesurer tout le nombre et type de cellules dans un échantillon. Les deux méthodes ont l'usage répandu mais diffèrent légèrement dans leur application.

Échantillon dans le microscope fluorescent - par le Weber de Micha

Weber de Micha | Shutterstock

Quelle est microscopie à fluorescence ?

La microscopie a existé avant la cytométrie de flux et était une partie intégrante de son développement. Un microscope fluorescent, en termes simples, est un photomicroscope amélioré qui emploie une lumière d'une intensité plus normale pour exciter des fluorophores dans le spécimen.

L'excitation des fluorophores (ou de la substance fluorescente) les incite pour émettre la lumière à une énergie inférieure avec de plus longues longueurs d'onde, qui produit l'image magnifiée. Elle est habituellement appliquée aux caractéristiques spécifiques de cellules. La fluorescence est réalisée utilisant des anticorps étiquetés avec les fluorophores qui visent des caractéristiques spécifiques. Cependant, la souillure peut également être loin moins de détail.

Quelle est cytométrie de flux ?

Avec la cytométrie de flux, les propriétés des cellules peuvent être mesurées. Ceci est fait sur une base individuelle pour chaque cellule et comprend des mesures telles que la taille de cellules, la granularité, et la quantité de composantes de cellules (telles que l'ADN, l'ARN messager, et les protéines intracellulaires).

Les valeurs quantitatives dérivées avec la cytométrie de flux peuvent être des valeurs relatives et absolues, mais sont en général relatives. La cytométrie de flux est largement appliquée pour recenser des cellules, cellules de compte, et trouve de certains bornes ou micros-organismes.

Comparer la microscopie à fluorescence et la cytométrie de flux

La microscopie à fluorescence et la cytométrie de flux mesurent les quantités quantitatives d'éléments cellulaires ; cependant, elles diffèrent dans les aspects de localiser les éléments cellulaires, le volume de cellules qu'elles peuvent traiter, et la préparation des échantillons avant l'analyse.

La microscopie à fluorescence peut montrer comment une composante est distribuée dans la cellule - uniformément ou groupée en compartiments anatomiques. Elle peut également montrer si ou non cette concentration change temporellement ou demeure statique.

La cytométrie de flux habituellement ne peut pas spécifier où la composante est exact plac à l'intérieur de la cellule. Ceci signifie également que quand la cytométrie de flux mesure un élément cellulaire, il le fait à un niveau d'entier-cellule, alors que la microscopie à fluorescence peut mesurer des composantes dans les compartiments cellulaires.

La microscopie à fluorescence peut habituellement mesurer des éléments cellulaires pour des dizaines ou des centaines de cellules. La cytométrie de flux, cependant, peut traiter de plus grands volumes de jusqu'à centaines de milliers de cellules. En outre, la cytométrie de flux peut employer les propriétés fluorescentes pour discerner et trier les cellules vivantes dans les milliers, alors que la microscopie à fluorescence est incapable de ceci.

Pour préparer des échantillons pour la cytométrie de flux, les cellules doivent être dans une suspension monodispersed ; la microscopie à fluorescence n'exige pas ceci. De plus, la microscopie à fluorescence peut fournir les informations sur des interactions cellulaires, qui sont rares en employant la cytométrie de flux.

Microscopie à fluorescence et cytométrie de flux en service

Comme mentionné, alors que la microscopie à fluorescence et la cytométrie de flux atteignent les mêmes objectifs plus généraux, elles ont leurs propres avantages et avantages, les rendant adaptés pour différents rôles. Une fois appliquées au même échantillon, cependant, elles peuvent donner différents résultats, comme proposé par de la recherche étudie.

Par exemple, une fois utilisée pour mesurer la fragmentation d'ADN en sperme, cytométrie de flux a indiqué des mesures plus élevées des dégâts de spermatozoïdes. Plus particulièrement, la cytométrie de flux a indiqué les dégâts qui étaient 2,6 fois plus grands en comparaison de la microscopie à fluorescence.

Les experts ne sont pas entièrement sûrs pourquoi on observe cette différence.  Avec la microscopie à fluorescence, la subjectivité devient une édition en plus de la longueur des observations, parce que les molécules fluorescentes deviennent blanchies.

Cependant, la cytométrie de flux a également une certaine place pour la variabilité. Il y a différentes méthodes pour déterminer la population d'intérêt et pour estimer combien d'événements sont positifs. Un seuil doit être réglé pour mesurer le pourcentage des molécules positives pour la borne fluorescente, mais ce seuil peut être réglé utilisant différents échantillons de référence et, ainsi, variabilité de cause entre les études.

En outre, pour cette étude spécifique, il peut être difficile de trouver fragmentation d'ADN en cellules. Des intensités fluorescentes sont distribuées dedans comme la voie qu'elles superposent l'autofluorescence, qui est une émission de lumière naturelle par des structures telles que des mitochondries.

Last Updated: Nov 20, 2018

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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