In vivo microscopia de fluorescência

In vivo a microscopia de fluorescência é uma técnica de imagem lactente que use a fluorescência às pilhas da imagem dentro dos organismos vivos. Este tipo de microscopia fornece resultados altamente exactos e permite-os a observação da revelação de determinados processos.

Um embrião tornando-se do melanogaster da drosófila com os três repórteres diferentes da fluorescência. Projecções máximas da intensidade. - Micha WeberUm embrião tornando-se do melanogaster da drosófila com os três repórteres diferentes da fluorescência. Projecções máximas da intensidade. (Micha Weber | Shutterstock)

Que é in vivo microscopia de fluorescência?

As experiências da fisiologia apontam compreender uma função celular no contexto de um organismo vivo. Isto foi conseguido inicialmente através dos exames histológicos das pilhas nos tecidos. A análise do tempo real foi feita à microscopia intravital de utilização possível, que permite o estudo de processos fisiológicos em detalhe e dá resultados exactos.

A fluorescência é muito eficiente e pode ser aplicada a muitas moléculas ou pilhas do interesse. Os eventos da pilha que podem ser estudados usando in vivo a microscopia de fluorescência incluem a proliferação de pilha, a migração, a diferenciação, ou acções intracelulares do íon.

As duas na maior parte técnicas de imagem lactente intravital usadas são:

  • Microscopia de fluorescência Confocal
  • microscopia do Dois-fotão

a microscopia do Dois-fotão fornece um acesso mais profundo aos tecidos do que a técnica confocal. Igualmente tem menos photobleaching e photodamage, porque a técnica não produz nenhuma luz fora de foco.

A microscopia de fluorescência Confocal confia no sistema de focalização dobro do `' que envolve passar um raio laser com um furo de pino na frente da fonte luminosa e outro na frente do detector. Fura o foco a luz correctamente na amostra e no detector, respectivamente.  

Ao discutir vantagens de usar in vivo a microscopia de fluorescência, tem-se que sublinhar que modela ex vivo normalmente produtos manufacturados da causa que conduz aos resultados falsos. Por outro lado, in vivo os modelos têm uma ocorrência reduzida dos produtos manufacturados, conseqüentemente são melhores por este motivo.

Adicionalmente, in vivo as experiências permitem a observação de mudanças fisiológicos sobre uma determinada quantia do tempo. Isto é útil para estudar processos tais como a revelação, a fisiologia da célula estaminal, e os pathogeneses.

Como preparar in vivo tecidos para a microscopia de fluorescência

A maioria de tecidos exigem a preparação permitir o acesso óptico. O modelo da pele-aleta envolve a remoção de uma correcção de programa da pele que permite o acesso cirúrgico aos órgãos e aos tecidos abaixo. Após a experiência/cirurgia, a correcção de programa da pele é suturada para trás sobre a seu lugar original.

O modelo da pele-aleta tem um risco moderado de necrose do tecido, e permite-o principalmente a derma mais baixa e o tecido subcutâneo a ser alcançados. A remoção cirúrgica da pele pode causar dano aos órgãos e aos tecidos do interesse porque é muito evasivo.

as pontas de prova Micro-endoscópicas podem ser usadas para fazer o sistema óptico menor, mas este método reduz a definição e o campo de visão das imagens adquiridas. Adicionalmente, os animais que movem-se e que respiram causam produtos manufacturados de borrão durante a imagem lactente que compromete os resultados. Os tecidos do interesse podem ser fixados para reduzir isto.

Aplicações in vivo da microscopia de fluorescência

A microscopia de Intravital do córtice do cérebro é usada na neurociência para estudar a actividade de redes neurais. Um estudo notável mediu pontos de verificação importantes (tais como o extravasação, a apreensão encontrada em pontos de ramificação vasculares, e o contacto protelado aos micro vasos sanguíneos) para a macro-metástase dentro do cérebro usando uma única pilha metastática. O efeito dos ferimentos da medula espinal e a progressão da regeneração foram estudados igualmente usando a microscopia intravital.

Além disso, a oftalmoscopia confocal foi usada para estudar a retina e para relatá-la nas mudanças às microestrutura sobre uma determinada quantia do tempo. As microestrutura examinadas incluem os nervos óticos, os capilares, e as pilhas do gânglio.

Outros usos foram notados também; por exemplo, um indicador abdominal da imagem lactente foi desenvolvido para seguir o crescimento de uma célula cancerosa colorectal no fígado do rato. A formação de micro-metástase foi observada, e esta experiência usou a imagem lactente interna do lapso de tempo de 10 horas que revelou a migração celular com pre-metástase.

A mesma migração não foi considerada em micro e na macro-metástase. A inibição farmacológica desta migração reduziu a carga metastática das pilhas de fígado, fazendo lhe um alvo potencial para terapias anticancerosas.

Finalmente, a microscopia de fluorescência foi usada in vivo para estudar a homeostase das células estaminais na ameia intestinal da célula estaminal. Descobriu-se que as células estaminais centrais (situadas dentro da base da cripta) eram inclinadas para a sobrevivência e as células estaminais da beira (situadas na parte superior da ameia) eram inclinadas para a perda e a substituição.

Fontes:

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Last Updated: Nov 21, 2018

Written by

Samuel Mckenzie

Sam graduated from the University of Manchester with a B.Sc. (Hons) in Biomedical Sciences. He has experience in a wide range of life science topics, including; Biochemistry, Molecular Biology, Anatomy and Physiology, Developmental Biology, Cell Biology, Immunology, Neurology  and  Genetics.

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