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In vivo microscopia de fluorescencia

In vivo la microscopia de fluorescencia es una técnica de proyección de imagen que utiliza fluorescencia a las células de la imagen dentro de organismos vivos. Este tipo de microscopia ofrece resultados altamente exactos y permite la observación del revelado de ciertos procesos.

Un embrión del melanogaster de la Drosophila que se convierte con tres diversos reporteros de la fluorescencia. Proyecciones máximas de la intensidad. - Micha WeberUn embrión del melanogaster de la Drosophila que se convierte con tres diversos reporteros de la fluorescencia. Proyecciones máximas de la intensidad. (Micha Weber | Shutterstock)

¿Cuál es in vivo microscopia de fluorescencia?

Los experimentos de la fisiología apuntan entender una función celular en el contexto de un organismo vivo. Esto fue lograda inicialmente a través de exámenes histológicos de células en tejidos. El análisis en tiempo real fue hecho posible usando la microscopia intravital, que permite el estudio de procesos fisiológicos detalladamente y da resultados exactos.

La fluorescencia es muy eficiente y se puede aplicar a muchas moléculas o células del interés. Las acciones de la célula que se pueden estudiar usando in vivo microscopia de fluorescencia incluyen la proliferación de célula, la migración, la diferenciación, o acciones intracelulares del ión.

Las dos sobre todo técnicas de proyección de imagen intravital usadas son:

  • Microscopia de fluorescencia confocal
  • microscopia del Dos-fotón

la microscopia del Dos-fotón ofrece un acceso más profundo a los tejidos que la técnica confocal. También tiene menos photobleaching y photodamage, pues la técnica no produce ninguna luz del fuera-de-foco.

La microscopia de fluorescencia confocal confía en el sistema de enfoque doble del `' que implica el pasar de un de rayo láser con un agujerito delante de la fuente de luz y otro delante del detector. Agujerea el foco la luz correctamente en la muestra y el detector, respectivamente.  

Al discutir ventajas de usar in vivo microscopia de fluorescencia, tiene que ser acentuado que ex vivo modela normalmente los artefactos de la causa que lleva a los resultados falsos. Por otra parte, in vivo los modelos tienen un acontecimiento reducido de artefactos, por lo tanto son mejores por este motivo.

Además, in vivo los experimentos permiten la observación de cambios fisiológicos durante una determinada cantidad de hora. Esto es útil para estudiar procesos tales como revelado, fisiología de la célula madre, y pathogeneses.

Cómo preparar los tejidos para in vivo la microscopia de fluorescencia

La mayoría de los tejidos requieren la preparación permitir el acceso óptico. El modelo de la piel-solapa implica el retiro de un remiendo de la piel que permite el acceso quirúrgico a los órganos y a los tejidos abajo. Después del experimento/de la cirugía, el remiendo de la piel se sutura detrás conectado a su situación original.

El modelo de la piel-solapa tiene un riesgo moderado de necrosis del tejido, y permite para que principal el dermis más inferior y el tejido subcutáneo sean alcanzados. El retiro quirúrgico de la piel puede causar daño a los órganos y a los tejidos del interés pues es muy evasivo.

las antenas Micro-endoscópicas se pueden utilizar para hacer el sistema óptico más pequeño, pero este método reduce la resolución y el campo visual de las imágenes detectadas. Además, los animales que se mueven y que respiran causan los artefactos que enmascaran durante la proyección de imagen que compromete los resultados. Los tejidos del interés se pueden reparar para reducir esto.

Usos in vivo de la microscopia de fluorescencia

La microscopia de Intravital de la corteza del cerebro se utiliza en neurología para estudiar la actividad de redes neuronales. Un estudio notable midió puntos de verificación importantes (tales como extravasación, la detención encontrada en los puntos que se ramificaban vasculares, y prolongó el contacto a los vasos sanguíneos micros) hacia macro-metástasis dentro del cerebro usando una única célula metastática. El efecto de los daños de la médula espinal y la progresión de la regeneración también se han estudiado usando microscopia intravital.

Además, la oftalmoscopia confocal se ha utilizado para estudiar la retina y para denunciar sobre los cambios a las microestructuras durante una determinada cantidad de hora. Las microestructuras examinadas incluyen los nervios ópticos, los capilares, y las células del ganglio.

Otras aplicaciones se han observado también; por ejemplo, una ventana abdominal de la proyección de imagen fue desarrollada para rastrear el incremento de una célula cancerosa colorrectal en el hígado del ratón. La formación de micro-metástasis fue observada, y este experimento utilizó la proyección de imagen intramuros de diez horas del lapso de tiempo que reveló la migración celular con la pre-metástasis.

La misma migración no fue considerada en micro y macro-metástasis. La inhibición farmacológica de esta migración redujo la carga metastática de las células de hígado, haciéndole objetivos potenciales para las terapias anticáncer.

Finalmente, in vivo la microscopia de fluorescencia se ha utilizado para estudiar el homeostasis de células madres en el lugar intestinal de la célula madre. Se ha descubierto que las células madres centrales (situadas dentro de la base de la cripta) eran en polarización negativa hacia supervivencia y las células madres de la banda (situadas en la parte superior del lugar) eran en polarización negativa hacia baja y el repuesto.

Fuentes:

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Last Updated: Nov 21, 2018

Written by

Samuel Mckenzie

Sam graduated from the University of Manchester with a B.Sc. (Hons) in Biomedical Sciences. He has experience in a wide range of life science topics, including; Biochemistry, Molecular Biology, Anatomy and Physiology, Developmental Biology, Cell Biology, Immunology, Neurology  and  Genetics.

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