Stratégies de déclenchement pour la cytométrie de flux

Pour analyser des résultats expérimentaux d'un cytometer de flux, il est nécessaire de mettre des « grilles » dans les caractéristiques. Essentiellement, ceci concerne remonter des cellules des caractéristiques assimilées, comme la dispersion légère avant, la dispersion de la lumière latérale et l'expression de borne.

Cellule conçue utilisant la microscopie à fluorescence - deux cellules coincées ensemble doivent être retirées utilisant le déclenchement. Par DrimaFilm

DrimaFilm | Shutterstock

Avant de régler une stratégie de déclenchement, il est indispensable de connaître les propriétés des cellules à s'analyser, comme la taille de cellules, l'expression relative des bornes et si des corps étrangers sont susceptibles d'avoir été introduits avant de faire fonctionner l'expérience.

Exemples du déclenchement

Diffusion latérale avant et

La diffusion vers l'avant est liée à la taille de la cellule, alors que la diffusion latérale est liée à la granularité des cellules, et ceci peut être employé pour différencier les cellules variées et les saletés. Utilisant cette information, il est possible de déclencher les caractéristiques de cytométrie de flux de sorte qu'il soit possible de trouver les globules blancs variés et de discerner ceux des saletés.

Endroit et hauteur de dispersion

Les doublets sont quand la cytométrie de flux trouve une cellule, mais c'était en fait deux cellules dans la grande proximité. Ceci peut poser des problèmes avec l'analyse de caractéristiques, mais déclenchant par hauteur de dispersion contre l'endroit de dispersion (en général avant), des doublets peuvent être recensés et retirés ainsi de l'analyse approfondie.

Que diriez-vous de l'expression de borne ?

Le déclenchement peut également être employé pour recenser les cellules qui expriment un générateur spécifique. Par exemple, des lymphocytes, qui expriment CD3, peuvent être séparés d'une prise de sang où les hématies ont été lysées.

Ces populations de CD3+ peuvent alors être analysées d'autres bornes, telles que le CD4 et les CD8, qui sont les bornes à cellule T. Encore autres, les lymphocytes T CD4/CD8 peuvent être analysés davantage l'expression de CD28 et de CD45RA, pour différencier entre le naïve, l'effecteur et les lymphocytes T de mémoire.

Borowitz et autres, utilisé une stratégie de déclenchement de détail pour recenser des cellules de leucémie des cellules de non-leucémie à l'aide de CD45 et de dispersion légère à angle droit pour déclencher la cytométrie de flux. Ils ont constaté que des cellules de leucémie pourraient être recensées par les niveaux intermédiaires de CD45 et de dispersion légère à angle droit inférieure, comme ces propriétés particulières sont seulement vues dans environ 5% de cellules de moelle osseuse de non-leucémie.

Une étude par Nilsson a employé des opérations de déclenchement multiples pour recenser les cellules souche hématopoïétiques rares, les cellules qui provoquent tous les globules sanguins.

Le déclenchement doit-il être fait manuellement ?

De nos jours, des outils logiciels d'ordinateur ont été développés pour faciliter l'analyse des caractéristiques de cytométrie de flux. Ceci comprend le curvHDR, qui a été développé par Naumann et autres, qui peut être employé pour le déclenchement semi-automatique et automatique pour des caractéristiques de cytométrie de flux.

Pendant que cela peut prendre un bon moment d'analyser manuellement des caractéristiques de cytométrie de flux, utilisant un logiciel peut réduire le temps nécessaire. Par exemple, si beaucoup de générateurs sont nécessaires pour différencier les cellules dans l'échantillon, ceci peut mener à une stratégie de déclenchement plus complexe qui pourrait probablement comprendre des temps sélectés de re-déclenchement de multiple de fractions. Dans ce cas, un logiciel serait très utile car il réduirait spectaculaire le temps nécessaire pour analyser les caractéristiques.

Un autre cas où l'emploi d'un logiciel peut être utile est de limiter la subjectivité qui vient avec l'analyse manuelle ; un logiciel peut reproduire une stratégie de déclenchement beaucoup plus exactement que s'il était fait manuellement, pour cette raison ceci signifierait que les caractéristiques seraient plus comparables. En outre, ce serait très utile si plus d'une personne effectuait la cytométrie de flux.

S'il y a intérêt en trouvant les populations cellulaires neuves, utilisant un logiciel peut faciliter ceci ; car le logiciel peut se fonder sur des algorithmes plutôt qu'une stratégie de déclenchement spécifique, ceci pourrait mettre en valeur les populations nouvelles qui ont pu avoir été manquées par le déclenchement manuel.

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Last Updated: Dec 18, 2018

Dr. Maho Yokoyama

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Dr. Maho Yokoyama

Dr. Maho Yokoyama is a researcher and science writer. She was awarded her Ph.D. from the University of Bath, UK, following a thesis in the field of Microbiology, where she applied functional genomics to Staphylococcus aureus . During her doctoral studies, Maho collaborated with other academics on several papers and even published some of her own work in peer-reviewed scientific journals. She also presented her work at academic conferences around the world.

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