Tecniche di espressione genica

L'espressione genica è un meccanismo altamente regolamentato che gestisce la funzione e l'adattabilità di tutte le celle viventi compreso i prokaryotes e gli eucarioti. Parecchie tecniche esistono per espressione genica di studio e di misura ed il suo regolamento. Alcune di queste tecniche sono vecchie ed affermate mentre altre sono tecniche relativamente nuove e multiple.

Il campo dell'analisi di espressione genica ha subito gli avanzamenti importanti nella ricerca biomedica. I metodi tradizionali hanno messo a fuoco sulla misurazione dell'espressione di un gene per volta e non in tutto il contesto biologico particolare. Tuttavia, oggi, le tecniche di espressione del mRNA piombo ai miglioramenti nell'identificazione del gene e nella sotto-classificazione di malattia, per esempio.

Tecniche di espressione genica

I metodi analitici possono essere usati per esaminare i livelli di espressione del mRNA o l'espressione differenziale del mRNA. Alcuni esempi di queste tecniche sono elencati sotto.

Tecniche che sono basse a mezzo-plex

Gene del reporter

Un gene contiene due segmenti funzionali. Uno è una sequenza di codifica del DNA, che contiene le istruzioni per la fabbricazione della proteina. L'altra è una sequenza del DNA chiamata un promotore, che è collegato a questa sequenza codificante e regolamenta la trascrizione del gene, attivando o sopprimendo la sua espressione.

Un'analisi del gene del reporter è usata per determinare il potenziale regolatore di una sequenza del DNA che è sconosciuta. Ciò comprende una sequenza del promotore che è collegata ad un gene rilevabile del reporter quali il luciferase, la β-galattosidasi o il β-glucuronidase. Gli esempi dei metodi impiegati per determinare la proteina espressa del gene del reporter sono la fluorescenza, capacità di assorbimento e luminescenza.

Macchiare nordico

Ciò è una tecnica usata per individuare le molecole specifiche del RNA presenti all'interno di una miscela del RNA. Macchiare nordico è impiegato nell'analisi di un campione del RNA da un tipo o da un tessuto delle cellule in modo da determinare l'espressione del RNA di determinati geni.

Macchiare occidentale

Macchiare occidentale è una tecnica per la rilevazione delle molecole di proteina specifiche all'interno di una miscela della proteina. Questa miscela potrebbe includere tutte le proteine che sono associate con un determinato tipo o tessuto delle cellule. La tecnica può contribuire a determinare la dimensione di una proteina e quanto di è espresso.

Ibridazione in situ fluorescente (FISH)

Ciò è una tecnica citogenetica che può essere usata per identificare ed individuare le sequenze specifiche del gene. Il PESCE può essere usato per prevedere le aberrazioni di numero di copia quali l'eliminazione, lo spostamento o l'amplificazione dei cromosomi. La tecnica è utilizzata nella diagnosi prenatale ed egualmente fornisce uno strumento utile nella diagnosi e nella prognosi preveduta di vari sarcomi. La tecnica egualmente è utilizzata nella dermatologia per contribuire a valutare le mole atipiche.

Reazione a catena inversa della polimerasi della trascrizione (RT-PCR)

Ciò è la tecnica più sensibile disponibile per la rilevazione e la misura del mRNA. Facendo uso di RT-PCR, le dimensioni del campione estremamente piccole possono essere utilizzate nella quantificazione del mRNA e la tecnica può in effetti fare questa facendo uso appena di un unicellulare.

Tecniche che sono più alto plex

Analisi seriale di espressione genica (SALVIA)

La SALVIA è una tecnica usata per creare una libreria di brevi tag di sequenza che possono ciascuno essere usati per individuare una trascrizione. Il livello di espressione della trascrizione può essere determinato valutando quante volte ogni tag è individuato. Questa tecnologia permette all'analisi completa di espressione attraverso il genoma.

Microarray del DNA

Inoltre noto come di biochip o del chip del DNA, un microarray del DNA è una superficie solida a cui una collezione di punti microscopici del DNA è fissata. I microarrays sono usati per determinare i livelli di espressione attraverso tantissimi geni o per eseguire genotyping attraverso le regioni differenti di genoma.

RNA seguente

Ciò si riferisce ai metodi impiegati per misurare la sequenza delle molecole del RNA. Gli esempi comprendono l'ordinamento del fucile da caccia delle molecole del cDNA acquistate da RNA con trascrizione inversa e le tecnologie usate per ordinare le molecole del RNA da un campione biologico in moda da potere essere la sequenza e l'abbondanza primarie di ogni molecola del RNA risolute.

Piastrellatura delle schiere

Una schiera della piastrellatura è un tipo di chip di microarray, con gli obiettivi contrassegnati del RNA o del DNA ibridati alle sonde fissate ad una superficie solida. Tuttavia, le sonde usate differiscono a quelle usate con i microarrays tradizionali. Piuttosto di quanto le sequenze conosciute o i geni preveduti che sono sondati, piastrellando le schiere sondi per le sequenze conosciute per essere presente in una regione contigious. Ciò può fornire informazioni sulle regioni che sono ordinate ma per cui le funzioni locali sono in gran parte sconosciute.

Sorgenti

[Ulteriore lettura: Espressione genica, macchiare occidentale]

Last Updated: May 24, 2019

Sally Robertson

Written by

Sally Robertson

Sally has a Bachelor's Degree in Biomedical Sciences (B.Sc.). She is a specialist in reviewing and summarising the latest findings across all areas of medicine covered in major, high-impact, world-leading international medical journals, international press conferences and bulletins from governmental agencies and regulatory bodies. At News-Medical, Sally generates daily news features, life science articles and interview coverage.

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