Técnicas da expressão genética

A expressão genética é um mecanismo altamente regulado que controle a função e a adaptação de todas as pilhas vivas que incluem prokaryotes e eukaryotes. Diversas técnicas existem para a expressão genética de estudo e de determinação e o seu regulamento. Algumas destas técnicas são velhas e bem conhecidas quando outro forem técnicas relativamente novas, multiplex.

O campo da análise da expressão genética submeteu-se a avanços principais na pesquisa biomedicável. Os métodos tradicionais centraram-se sobre a medição da expressão de um gene de cada vez e não em todo o contexto biológico particular. Contudo, hoje, as técnicas da expressão do mRNA conduziram às melhorias na identificação do gene e na secundário-classificação da doença, por exemplo.

Técnicas da expressão genética

Os métodos analíticos podem ser usados para examinar níveis da expressão do mRNA ou a expressão diferencial do mRNA. Alguns exemplos destas técnicas estão listados abaixo.

Técnicas que são baixas a meados de-plex

Gene do repórter

Um gene contem dois segmentos funcionais. Um é uma seqüência de codificação do ADN, que contenha as instruções para fazer uma proteína. A outro é uma seqüência do ADN chamada um promotor, que seja ligado a esta região da codificação e regule a transcrição do gene, ativando ou suprimindo sua expressão.

Um ensaio do gene do repórter é usado para determinar o potencial regulador de uma seqüência do ADN que seja desconhecida. Isto envolve uma seqüência do promotor que está sendo ligada a um gene detectável do repórter tal como o luciferase, a β-galactosidase ou o β-glucuronidase. Os exemplos dos métodos usados para determinar a proteína expressada do gene do repórter são fluorescência, absorvência e luminescência.

Mancha do norte

Esta é uma técnica usada para detectar as moléculas específicas do RNA actuais dentro de uma mistura do RNA. A mancha do norte é empregada na análise de uma amostra do RNA de um tipo ou de um tecido da pilha para determinar a expressão do RNA de determinados genes.

Mancha ocidental

A mancha ocidental é uma técnica para detectar moléculas de proteína específicas dentro de uma mistura da proteína. Esta mistura pôde incluir todas as proteínas que são associadas com um determinado tipo ou tecido da pilha. A técnica pode ajudar a determinar o tamanho de uma proteína, e quanto dele é expressado.

Hibridação in situ fluorescente (FISH)

Esta é uma técnica citogénica que possa ser usada para identificar e encontrar seqüências específicas do gene. Os PEIXES podem ser usados para visualizar aberrações do número de cópia tais como o supressão, a translocação ou a amplificação dos cromossomas. A técnica é usada no diagnóstico pré-natal e igualmente fornece uma ferramenta útil no diagnóstico e no prognóstico previsto de vários sarcomas. A técnica é usada igualmente na dermatologia para ajudar a avaliar toupeiras atípicas.

Reacção em cadeia reversa da polimerase da transcrição (RT-PCR)

Esta é a técnica a mais sensível disponível para detectar e determinar o mRNA. Usando RT-PCR, os tamanhos da amostra extremamente pequenos podem ser usados na quantificação do mRNA e a técnica pode de facto fazer esta que usa apenas uma única pilha.

Técnicas que são um plex mais alto

Análise de série da expressão genética (SÁBIO)

O SÁBIO é uma técnica usada para criar uma biblioteca das etiquetas curtos da seqüência que podem cada um ser usadas para detectar um transcrito. O nível da expressão do transcrito pode ser determinado avaliando quantas vezes cada etiqueta é detectada. Esta tecnologia permite a análise detalhada da expressão através do genoma.

Microarray do ADN

Igualmente sabido como do biochip ou da microplaqueta do ADN, um microarray do ADN é uma superfície contínua a que uma coleção de pontos microscópicos do ADN é anexada. Os microarrays são usados para determinar níveis da expressão através de um grande número genes ou para executar genotyping através das regiões diferentes de um genoma.

RNA segs.

Isto refere os métodos usados para medir a seqüência de moléculas do RNA. Os exemplos incluem arranjar em seqüência da espingarda das moléculas do cDNA adquiridas do RNA com a transcrição reversa e as tecnologias usadas para arranjar em seqüência moléculas do RNA de uma amostra biológica de modo que a seqüência e a abundância preliminares de cada molécula do RNA possam ser determinadas.

Telhando disposições

Uma disposição da telha é um tipo de microplaqueta do microarray, com os alvos etiquetados do ADN ou do RNA cruzados às pontas de prova anexadas a uma superfície contínua. Contudo, as pontas de prova usadas diferem àquelas usadas com microarrays tradicionais. Um pouco do que as seqüências conhecidas ou os genes previstos que estão sendo sondados, telhando disposições sonde para as seqüências conhecidas estam presente em uma região contigious. Isto pode fornecer a informação sobre as regiões que são arranjadas em seqüência mas para quais as funções locais são pela maior parte desconhecidas.

Fontes

[Leitura adicional: Expressão genética, mancha ocidental]

Last Updated: May 24, 2019

Sally Robertson

Written by

Sally Robertson

Sally has a Bachelor's Degree in Biomedical Sciences (B.Sc.). She is a specialist in reviewing and summarising the latest findings across all areas of medicine covered in major, high-impact, world-leading international medical journals, international press conferences and bulletins from governmental agencies and regulatory bodies. At News-Medical, Sally generates daily news features, life science articles and interview coverage.

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