KO do gene contra o Knockdown

Muitas técnicas na biologia molecular são baseadas em suprimir ou em alterar a função dos genes. O supressão ou a inactivação dos genes são sabidos como o KO ou o knockdown.

Crédito: Hamdee/Shutterstock.com

Os genes são o código por que todas as funções de um organismo são realizadas. Em a maioria de organismos, os genes são codificados no ADN, o ADN é transcrito no RNA, e o RNA é traduzido nas proteínas, que se transformam os blocos de apartamentos e os catalizadores para o organismo inteiro.

O knockdown do gene dos termos e o KO do gene são usados frequentemente permutavelmente. Contudo, há algumas distinções que podem ser feitas.

KO do gene

O KO do gene é a remoção total ou a desactivação permanente de um gene com a genética. As experiências as mais adiantadas do KO do gene foram feitas em Escherichia Coli.

O método tem sido refinado e desenvolvido para muitos outros organismos desde então, particularmente ratos. Os ratos do KO são de uso geral na pesquisa estudar os efeitos dos genes que podem ter o significado na saúde humana.

Um exemplo recente de um estudo que usa ratos do KO é uma investigação dos papéis de proteínas de Xirp na síndrome nocturno inexplicado repentina da morte (SUNDS) e na síndrome de Brugada na população chinesa de Han por Cheng, e outros.

Os pesquisadores seleccionaram genes de Xirp nos povos com as duas síndromes, e identificaram duas variações do gene que podem ser patogénicos. Usando ratos do KO Xirp2, aprenderam que os corações do rato sem Xirp2 exibiram muitas anomalias.

Este estudo identificou as variações de Xirp que são prováveis jogar um papel na síndrome de SUNDS e de Brugada, e revela o papel de Xirp2 na função cardíaca.

Knockdown do gene

Os estudos onde os genes estão desactivados ou suprimido um pouco do que imediato suprimido estão referidos às vezes enquanto o knockdown do gene estuda, um pouco do que o KO estudam. Isto implica geralmente que o gene era originalmente actual ou funcional.

Ao knockdown um produto do gene transiente, um oligonucleotide pode ser usado para ligar à codificação do gene para ele, ou a seu mRNA, conduzindo a uma mudança provisória na expressão.

O gene que silenciam, o gene que editam, e o KO condicional do gene são formulários de experiências do knockdown do gene. O knockdown do gene pode ser flexibilidade completa ou parcial, oferecendo em estudar o papel do gene na biologia do organismo.

No gene que silenciam, ou a interferência do RNA (RNAi), RNA de interferência pequeno (siRNA) ou RNA curto do gancho de cabelo (shRNA) são usados para neutralizar o RNA de mensageiro para um gene específico. Isso suprime eficazmente a expressão do gene.

Este método foi usado para visar oncogenes como Bcl-2 e p53, assim como genes implicados na doença neurológica, em desordens hereditárias, e em infecções virais.

KO condicional

O KO condicional é uma aproximação aos estudos do knockdown nos genes que seriam letais se foram batidos completamente para fora.

O método condicional original do KO utilizou um recombinase local-específico chamado Cre que recombines as seqüências curtos do alvo conhecidas como LoxP. Outros recombinases desde têm sido desenvolvidos e usados para estudos condicionais do KO.

O gene que edita sistemas gosta dos nucleases do dedo do zinco (ZFNs), transcrição activador-como nucleases do effector (TALENs), e a repetição palíndroma curto regularmente interspaced aglomerada (CRISPR), é uma alternativa emergente aos recombinases local-específicos.

Estas enzimas começaram a substituir muitos métodos fundacionais na biologia molecular tal como a clonagem. O KO condicional do gene é um outro exemplo onde tenham algumas vantagens sobre as ferramentas originais.

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Last Updated: Feb 26, 2019

Dr. Catherine Shaffer

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Dr. Catherine Shaffer

Catherine Shaffer is a freelance science and health writer from Michigan. She has written for a wide variety of trade and consumer publications on life sciences topics, particularly in the area of drug discovery and development. She holds a Ph.D. in Biological Chemistry and began her career as a laboratory researcher before transitioning to science writing. She also writes and publishes fiction, and in her free time enjoys yoga, biking, and taking care of her pets.

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