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Usos de RNAi Genoma-Ancho

La interferencia del ARN (RNAi) es un mecanismo genético que utiliza pequeño RNAs de interferencia (siRNAs) para apuntar y para neutralizar el ARN de mensajero (mRNA). Esto da lugar a la supresión del gen del objetivo que es expresado.

Haber: vchal/Shutterstock.com

RNAi es un proceso natural que primero fue caracterizado por completo por el fuego y Craig de Andrew suaves en 1998. Desde entonces, RNAi se ha convertido en un método del caballo de labranza para los estudios de la función individual del gen. Más recientemente, RNAi se ha desplegado en el nivel genoma-ancho, permitiendo que los investigadores fijen cada gen en un genoma para su papel en un proceso celular determinado.

Desarrollar un protocolo

Un estudio importante que implicaba RNAi genoma-ancho fue publicado en 2014 y describe phenotyping de la alto-producción del brucei de Trypanosoma; el organismo que causa enfermedad durmiente. Las pantallas genéticas anteriores habían sido realizadas en el organismo, pero habían dejado por lo menos el 50% de los genes sin una asignación funcional.

Las ventajas del método eran que las condiciones experimentales podrían ser normalizadas a través de todas las células en la pantalla usando un único matraz de cultura, y el uso de una serie de la DNA de denunciar densidad demográfica relativa evita los problemas de la contaminación y de mislabeling.

las pantallas Genoma-anchas generan típicamente muchos resultados en un único experimento, revelando centenares de funciones importantes o de asociaciones. En el estudio 2014, RNAi genoma-ancho permitió que los investigadores desarrollaran un protocolo para decodificar eficacia y resistencia antis-trypanosomal de la droga, y determina las cohortes de los genes implicados en el quorum que detectaba el camino de la transmisión de señales del organismo.

Resistencia a los medicamentos el decodificar

Las drogas que apuntan procesos epigenéticos están mostrando resultados fuertes en terapia del cáncer. Los inhibidores del deacetylase de la histona (HDAC) son una tal clase de drogas. Estas drogas tienen efectos anticáncer el apuntar del tumor y de las células del no-tumor, incluyendo la inducción del apoptosis (muerte celular programada).

Sin embargo, en juicios clínicas, algunos pacientes son insensibles a estas drogas. Si los factores que contribuían a la resistencia de HDAC se podrían apuntar por otra droga, la combinación pudo perfeccionar la reacción a los inhibidores de HDAC.  

En un estudio, los investigadores utilizaron las células humanas del tumor con la resistencia detectada al inhibidor de HDAC, ácido suberanilohydroxamic, y realizaron una pantalla genoma-ancha de RNAi. La pantalla determinó la proteína GLI1 del dedo del cinc como gen nuevo para la resistencia al vorinostat.

La precipitación de GLI1 con el tratamiento del vorinostat cambio con éxito el equilibrio de la favorable-supervivencia y de genes favorable-apoptotic hacia apoptosis, indicando una estrategia prometedora para el revelado de la droga de combinación.

Minado de objetivos más efectivos

El multiforme de Glioblastoma (GBM), un cáncer del cerebro, es uno del más mortífera y difícil tratar formas del cáncer. Los científicos creen una subpoblación de células llamadas GBM vástago-como juego de las células (GBM-SCs) un papel importante en el lanzamiento y mantenimiento del tumor mientras que crece.

Estas células se renuevan y los distinguen en linajes de la célula como las neuronas y astrocyte-como las células. GBM-SCs es también más resistente a la quimioterapia y a la radiación que las células a granel del tumor, que significa su población se enriquecen a menudo después de terapia.

Se piensa que algunos genes en GBM-SCs pueden ofrecer los objetivos para el tratamiento efectivo de la droga. Para determinar esos genes, los investigadores realizaron una pantalla en grande de RNAi. Probaron el efecto de la precipitación sobre de 10.000 genes y de muchos golpes giró hacia arriba por el experimento, determinaron y validaron el suero/la cinasa regulada glucocorticoide 1 (SGK1) como gen dominante de la favorable-supervivencia en la proliferación y la supervivencia de GBM-SC.

La pantalla genoma-ancha de RNAi es una innovación potente que multiplica la potencia de la interferencia del ARN por centenares o millares de épocas. Es una adición importante al alcance de las opciones para las pantallas genéticas de la alto-producción.

Fuentes:

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Last Updated: Feb 26, 2019

Dr. Catherine Shaffer

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Dr. Catherine Shaffer

Catherine Shaffer is a freelance science and health writer from Michigan. She has written for a wide variety of trade and consumer publications on life sciences topics, particularly in the area of drug discovery and development. She holds a Ph.D. in Biological Chemistry and began her career as a laboratory researcher before transitioning to science writing. She also writes and publishes fiction, and in her free time enjoys yoga, biking, and taking care of her pets.

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