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Pilhas de anfitrião para produzir proteínas de recombinação

As proteínas de recombinação são geradas convencionalmente transfecting o DNA recombinante em uma pilha de anfitrião, pelo seguimento que as pilhas de anfitrião sejam cultivadas e pelo ADN transfected transcrito e traduzido. As pilhas de anfitrião diferentes podem ser escolhidas para a produção de recombinação da proteína, a escolha de que depende do tipo de proteína que precisa de ser gerada, seus actividade funcional e rendimento necessário.

As proteínas de recombinação, tais como os factores de coagulação (mostrados aqui) podem ser produzidas usando um número de pilhas de anfitriãoKateryna Kon | Shutterstock

Sistemas mamíferos

Os sistemas mamíferos são usados frequentemente expressar proteínas mamíferas, desde que representam um ambiente physiologically relevante. Este sistema é usado produzindo anticorpos humanos, proteínas complexas, e outras proteínas que são usadas em ensaios baseados em celulas.

O sistema mamífero da expressão pode igualmente ser usado para a expressão transiente ou estável das proteínas dentro das linha celular. A expressão transiente pode gerar grandes quantidades de proteínas dentro de uma a dois semanas, quando as linha celular com expressão estável puderem ser usadas sobre diversas experiências.

Os sistemas da expressão transiente usam culturas de suspensão e têm a capacidade para produzir rendimentos do relvado/litro. Também, os sistemas mamíferos têm um de mais alto nível da dobradura do nativo e das alterações cargo-translational comparadas a outros sistemas.

Sistemas da expressão do insecto

As pilhas do insecto são uma outra opção para gerar proteínas de recombinação. As pilhas do insecto fornecem muitas vantagens, o benefício principal de que é que o sistema pode ser escalado acima e adaptado para a expressão da grande escala das proteínas que são funcional similares às proteínas mamíferas.

Além disso, os sistemas da expressão do insecto podem gerar rendimentos até 500ug/L. Contudo, as desvantagens do sistema incluem o lengthiness do processo e cultivam as circunstâncias que são mais desafiantes em comparação com o sistema prokaryotic.

O papel dos fermentos e de fungos filamentous

Saccharomyces Cerevisiae eram as primeiras espécies do fermento que foram usadas com a finalidade de fazer proteínas de recombinação. Esta espécie, junto com diversas outras espécies do fermento, segrega a proteína de recombinação dentro recentemente produzida aos media de cultura. As pilhas de fermento podem igualmente executar a dobradura correcta e alterações cargo-translational de proteínas mamíferas em contraste com os sistemas prokaryotic.

Uma desvantagem deste sistema é a diferença no glycosylation das proteínas expressadas em pilhas de fermento quando comparada às pilhas mamíferas. Os sistemas do fermento podem ser usados para gerar as proteínas que não exigem o glycosylation. A insulina é um exemplo notável, daqui os sistemas do fermento foram usados extensivamente para produzir esta proteína.

Os fungos Filamentous foram usados igualmente para gerar vários tipos de proteínas de recombinação. Os fungos podem segregar até 30g/L da proteína. Contudo, os fungos igualmente produzem proteases que limita seu uso gerar proteínas de recombinação.

Sistemas bacterianos

As bactérias podem ser cultivadas e crescido facilmente e razoavelmente rapidamente, fazendo este sistema popular com pesquisadores. As pilhas bacterianas podem igualmente render níveis elevados de proteína de recombinação.

A desvantagem principal deste sistema é a expressão de proteínas não-funcionais, porque as bactérias não legiões a maquinaria interna conseguem a dobradura ou as alterações cargo-translational de proteínas mamíferas. Em alguns casos, estas proteínas podem igualmente tornar-se insolúveis, conseqüentemente necessitando desnaturalizadores ásperos e procedimentos da proteína-refolding para recuperar as proteínas de recombinação.

Sistemas sem célula da expressão

Em sistemas sem célula, a síntese da proteína pode ser realizada in vitro usando extractos das pilhas inteiras que são compatíveis com tradução. Estes extractos da pilha contêm todas as moléculas e enzimas que são necessários transcrever, traduzem, e o cargo-translationally altera a proteína de recombinação.

Com suplementos adicionais dos cofactor, as proteínas do interesse podem ser formadas em questão de horas. Contudo, este sistema não pode ser aplicável para a produção da grande escala de proteínas de recombinação. As vantagens deste sistema incluem que as proteínas podem ser sintetizadas sem cultivo da pilha; também, é possível expressar junto muitas proteínas.

Síntese química da proteína

Este método é usado para a síntese das proteínas de recombinação que têm os ácidos aminados ou as proteínas não naturais que são tóxicos na natureza. Embora este método forneça uma maneira de gerar proteínas puras, a quantidade do produto é limitada. Também, o método pode ser caro para umas correntes mais longas dos polipeptídeos.

Fontes

Last Updated: Mar 27, 2019

Dr. Surat P

Written by

Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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