Comment est-ce que des anticorps sont conjugués ?

Des anticorps conjugués sont employés dans différentes approches cliniques et non-cliniques. Par exemple, l'anticorps-médicament conjugue (ADCs) et des radioimmunoconjugates (RICs) peuvent être employés dans la clinique pour la distribution de la thérapeutique, alors que des anticorps marqués avec une balise fluorescente peuvent être employés dans le laboratoire pour l'immunofluorescence et l'analyse occidentale de tache.

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Une grande variété de molécules peuvent être employées pour la conjugaison, et leur choix dépend du but du conjugué d'anticorps, ainsi que de la méthode préférée de conjugaison.

In vivo les applications (des CDA et RICs) bénéficient grand des techniques de conjugaison de site-détail, tandis que les utilisations in vitro (immunofluorescence et analyse occidentale de tache) concernent généralement la conjugaison classique de résidu d'acide aminé.

In vitro ou in vivo ?

Les conjugués in vitro d'anticorps exigent seulement la maintenance de la spécificité et de l'affinité obligatoires d'antigène, alors qu'in vivo les applications doivent également avoir les sites spécifiques de modification et le rapport de charge-à-anticorps. Ceci assure la sécurité et l'efficacité.

Pour des analyses basées sur anticorps (immunoessais), l'anticorps employé pour trouver l'antigène d'intérêt doit être conjugué à une molécule qui peut être trouvée, souvent désignée sous le nom de la marque. Les anticorps d'IgG, qui sont utilisés généralement pour des immunoessais, contiennent les régions qui ne sont pas des sites antigène-grippants réels qui ont la propension de gripper une molécule de marquage (telle que l'enzyme ou le radio-isotope).

Les médicaments cytotoxiques liés aux anticorps spécifiques de tumeur (CDA) sont une voie révolutionnaire de fournir des traitements contre le cancer. Ils retiennent beaucoup d'avantages énormes tels que la réduction de toxicité systémique, l'augmentation du potentiel de cellule-massacre, ainsi que la tolérabilité patiente de médicament. Tandis que la conjugaison des molécules radioactives aux anticorps spécifiques de tumeur dans RICs aident également en fournissant des radiothérapies à un patient, elles peuvent également être employées pour des études précises de représentation du cancer.

Sites de conjugaison

Il y a une myriade de différents sites qui peuvent être employés sur un anticorps pour gripper le conjugué ; ce sont principalement interaction protéine-protéine intense (par exemple domaine FC-grippant), cystéines conçues, acides aminés naturels, accepteurs de nucléotide, acides aminés non-naturels, les N-terminus du réseau lourd et léger, la partie d'hydrate de carbone et les balises conçues.

En utilisant les résidus naturels conçus ou réactifs comme sites de conjugaison, qui est type lysine ou cystéine, il y a un défi pour régler la stoechiométrie des réactions et pour produire la substance cohérente d'anticorps. Ceci a mené au développement des techniques telles que la mutagénèse dirigée site-dirigée, mais également à d'autres qui comprennent de nombreuses opérations d'enzymes ou hôtes variables de protéine.

Conjugaison de résidu d'acide aminé

Bien que presque tous les acides aminés pourraient être les candidats potentiels pour le site de conjugaison, le thiol réactif en cystéine et l'amine primaire nucléophile en lysine sont généralement choisis par des chercheurs.

techniques de conjugaison de Site-détail

la conjugaison de Site-détail diffère de la conjugaison typique de résidu d'acide aminé. La raison principale est que, à la différence des acides aminés abondants en anticorps (tels que la lysine ou la cystéine), les conjugaisons de site-détail grippent des molécules seulement au seul et particulièrement sélecté site qui a été effectué par une structure soigneusement conçue d'anticorps.

Principes de conjugaison d'anticorps

Pendant la conjugaison, les groupes réactifs sur la marque (b) et l'anticorps (a) forment une liaison covalente les uns avec les autres.

Il y a deux types principaux de méthodes de dépistage d'anticorps : direct et indirect. Ceci signifie que marqué et l'anticorps détectable peut être directement fixé à l'antigène, ou être fixé à un anticorps non étiqueté qui a lié à l'antigène d'intérêt (ce dernier représentant une méthode indirecte).

En tous cas, la méthode indirecte a plus d'opérations d'incubation et de lavage, alors que la méthode directe retire le risque de grippement non spécifique se produisant sur les anticorps secondaires qui produiront des résultats fallacieux.

Choix d'une molécule de marque

Il y a un certain nombre de différentes options en choisissant une marque qui contient un groupe B réactif, par exemple : biotine, particule, enzyme, teinture, protéine fluorescente et streptavidin. Cette décision est indispensable et affectera comment le chercheur prépare leur anticorps et détermine les modifications qu'elles anticorps exigeront.

On peut mentionner un manuel qui contient une liste de groupes fonctionnels en anticorps, ainsi que les groupes de produit chimique et réactifs conjugués associés qui pourraient être sur la marque. Bien qu'il y ait une liste considérable d'options, les réactifs populaires utilisés dans ce domaine sont lysine et glutamate et aspartate appareillés (anticorps) ; Date d'achèvement prévue, 2-IT et SMCC (produits chimiques conjugués) ; et Maleimide, NHS (succinimidyl) et thiol (produits chimiques conjugués).

Prévention de la nécessité de modifier l'anticorps quand le choix d'un groupe fonctionnel est important en tant que réaction directe des groupes de réactions de marque (b) pour l'anticorps sous sa forme indigène et réduira le nombre d'opérations exigées. La plupart des marques sont disponibles dans le commerce et n'exigent pas du chercheur de produire leurs propres moyens.

Sources

[davantage de relevé : anticorps]

Last Updated: Dec 11, 2018

Chloe Barnett

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Chloe Barnett

Chloe has a B.Sc. in Medical Sciences from the University of Leeds and during her time there she enjoyed being close to the Yorkshire dales. Chloe loves the outdoors, spending her spare time hiking and exploring the UK countryside as well as listening to live music and running.

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