¿Cómo se conjugan los anticuerpos?

Los anticuerpos conjugados se utilizan en diversas aproximaciones clínicas y no-clínicas. Por ejemplo, la anticuerpo-droga conjuga (ADCs) y los radioimmunoconjugates (RICs) se pueden utilizar en la clínica para el lanzamiento de la terapéutica, mientras que los anticuerpos etiqueta con una etiqueta fluorescente se pueden utilizar en el laboratorio para la inmunofluorescencia y el análisis occidental de la mancha blanca /negra.

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Una amplia variedad de moléculas se pueden utilizar para la conjugación, y su selección es relacionada en el propósito de la conjugación del anticuerpo, así como el método preferido de conjugación.

In vivo los usos (los ADC y RICs) se benefician grandemente de técnicas sitio-específicas de la conjugación, mientras que las aplicaciones ines vitro (inmunofluorescencia y análisis occidental de la mancha blanca /negra) implican generalmente la conjugación clásica del residuo del aminoácido.

¿In vitro o in vivo?

Las conjugaciones ines vitro del anticuerpo requieren solamente el mantenimiento de la especificidad y de la afinidad obligatorias del antígeno, mientras que in vivo los usos deben también tener índice específica de los sitios y del carga-a-anticuerpo de la modificación. Esto asegura seguro y eficacia.

Para los análisis anticuerpo-basados (immunoensayos), el anticuerpo usado para descubrir el antígeno del interés se debe conjugar a una molécula que pueda ser descubierta, designada a menudo la escritura de la etiqueta. Los anticuerpos de IgG, que son de uso general para los immunoensayos, contienen las regiones que no son los sitios antígeno-obligatorios reales que tienen la propensión a atar una molécula de etiqueta (tal como enzima o radioisótopo).

Las drogas citotóxicas limitadas a los anticuerpos específicos del tumor (ADC) son una manera revolucionaria de entregar tratamientos contra el cáncer. Llevan a cabo muchas enormes ventajas tales como reducción de la toxicidad sistémica, aumento del potencial de la célula-matanza, así como tolerabilidad paciente de la droga. Mientras que la conjugación de moléculas radioactivas a los anticuerpos específicos del tumor en RICs también ayuda en la entrega de radiotherapies a un paciente, pueden también ser utilizados para los estudios exactos de la proyección de imagen del cáncer.

Sitios de la conjugación

Hay una miríada de diversos sitios que se puedan utilizar en un anticuerpo para atar la conjugación; éstas son sobre todo acción recíproca fuerte de la proteína-proteína (e.g. dominio Fc-obligatorio), cisteínas dirigidas, aminoácidos naturales, puntos de enlace del nucleótido, aminoácidos no-naturales, el N-término de la cadena pesada y liviana, la mitad del hidrato de carbono y etiquetas dirigidas.

Al usar residuos naturales dirigidos o reactivos como sitios de la conjugación, que es típicamente lisina o cisteína, hay un reto para controlar la estequiometría de las reacciones y para producir especie constante del anticuerpo. Esto ha llevado al revelado de técnicas tales como mutagénesis sitio-dirigida, pero también a otros que incluyen pasos numerosos de la enzima o los ordenadores principal diversos de la proteína.

Conjugación del residuo del aminoácido

Aunque casi todos los aminoácidos podrían ser candidatos potenciales al sitio de la conjugación, el tiol reactivo en cisteína y la amina primaria nucleofílica en lisina son elegidos generalmente por los investigadores.

técnicas Sitio-específicas de la conjugación

la conjugación Sitio-específica difiere de la conjugación típica del residuo del aminoácido. La razón primaria es que, a diferencia de los aminoácidos abundantes en anticuerpos (tales como lisina o cisteína), las conjugaciones sitio-específicas atan las moléculas solamente al sitio único y especialmente seleccionado que se ha hecho a través de una estructura cuidadosamente dirigida del anticuerpo.

Principios de la conjugación del anticuerpo

Durante la conjugación, los grupos reactivos en la escritura de la etiqueta (b) y el anticuerpo (a) forman una ligazón covalente con uno a.

Hay dos tipos principales de métodos de detección del anticuerpo: directo e indirecto. Esto significa que etiqueta y el anticuerpo perceptible se puede sujetar directamente al antígeno, o sujetar a un anticuerpo sin etiqueta que ha limitado al antígeno del interés (este último que representa un método indirecto).

En todo caso, el método indirecto tiene más pasos de la incubación y de la estela turbulenta, mientras que el método directo quita el riesgo de atascamiento no específico que ocurre en los anticuerpos secundarios que producirán resultados engañosos.

Elegir una molécula de la escritura de la etiqueta

Hay varias diversas opciones al elegir una escritura de la etiqueta que contiene a un b-grupo reactivo, por ejemplo: biotina, partícula, enzima, tinte, proteína fluorescente y streptavidin. Esta decisión es vital y afectará a cómo el investigador trata su anticuerpo y determina las modificaciones que anticuerpo requerirán.

Un libro de texto se puede referir que contiene un filete de grupos funcionales en anticuerpos, así como los grupos conyugal asociados del substancia químico y reactivos que podrían estar en la escritura de la etiqueta. Aunque haya un filete extenso de opciones, los reactivos populares usados en este campo son lisina y glutamato y aspartato emparejados (anticuerpos); EDC, 2-IT y SMCC (substancias químicas conyugal); y Maleimide, NHS (succinimidyl) y tiol (substancias químicas conyugal).

Evitar la necesidad de modificar el anticuerpo cuando elegir a un grupo funcional es importante como reacción directa de los grupos de las reacciones de la escritura de la etiqueta (b) para el anticuerpo en su forma nativa y reducirá el número de pasos requeridos. La mayoría de las escrituras de la etiqueta son disponibles en el comercio y no requieren al investigador producir sus los propio.

Fuentes

[lectura adicional: anticuerpo]

Last Updated: Dec 11, 2018

Chloe Barnett

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Chloe Barnett

Chloe has a B.Sc. in Medical Sciences from the University of Leeds and during her time there she enjoyed being close to the Yorkshire dales. Chloe loves the outdoors, spending her spare time hiking and exploring the UK countryside as well as listening to live music and running.

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