Avertissement : Cette page est une traduction automatique de cette page à l'origine en anglais. Veuillez noter puisque les traductions sont générées par des machines, pas tous les traduction sera parfaite. Ce site Web et ses pages Web sont destinés à être lus en anglais. Toute traduction de ce site et de ses pages Web peut être imprécis et inexacte, en tout ou en partie. Cette traduction est fournie dans une pratique.

Comment est-ce que des anticorps sont validés ?

Si un anticorps n'est pas spécifique ou assez sélecteur pour son application, il grippera à plusieurs différents épitopes, réduisant son exactitude et coûtant de ce fait le temps et l'argent de laboratoire. L'exactitude est également affectée si les anticorps du même constructeur ou lot ne produisent pas des résultats reproductibles.

De façon générale, ces éditions peuvent mener aux faux positifs et au bruit de fond excessif, évitant le dépistage des résultats principaux. Par conséquent, dans une validation appelée de processus d'anticorps, des anticorps sont testés afin de s'assurer qu'ils sont sélecteurs, reproductible, et assez détail pour leur application.

Illustration dKateryna Kon | Shutterstock

En sélectant une méthode de validation d'anticorps, l'utilisation désirée de l'anticorps doit être considérée, avec différentes applications exigeant différentes formes de validation. Juste parce qu'un anticorps convient pour l'application dans éponger occidental ne signifie pas qu'il convient pour un ELISA. Par conséquent, beaucoup de différentes méthodes sont procurables pour la validation des anticorps, comme décrit ci-dessous.

Validation normale

Il y a beaucoup de différentes méthodes traditionnelles procurables pour la validation des anticorps. Par exemple, éponger occidental, immunohistochimique souillant, immunofluorescence, spectroscopie de masse, et ordonnancer. Ces méthodes sont toutes fréquemment employées pour s'assurer que l'antigène correct est sélecté et qu'il y a d'activité hétérospécifique minimale avec d'autres antigènes.

Validation améliorée

Les développements récents ont mené aux méthodes nouvelles de validation d'anticorps. Il y a cinq piliers principaux de validation améliorée, comprenant :

Validation génétique

Dans cette méthode, l'objectif de protéine est frappé en bas d'utiliser une de plusieurs différentes méthodes (telles que CRISPR ou siRNA). Comparaison entre l'anticorps souillant avant et après que le coup de grâce explique alors la spécificité et la sélectivité de l'anticorps, car hautement un anticorps spécifique n'expliquera aucune souillure de suivre le coup de grâce de la protéine.

Validation orthogonale

Dans cette méthode, la quantité de dépistage de protéine par l'intermédiaire du marquage d'anticorps est comparée à la valeur trouvée par l'intermédiaire d'une méthode anticorps-indépendante. Si on observe la même configuration dans les deux méthodes, alors l'anticorps convient pour l'application. Cependant, s'il est différent, ceci explique une édition avec la spécificité et la sélectivité.

Validation indépendante d'anticorps

L'application d'une seconde, anticorps précédemment validé est une autre voie par laquelle le grippement non spécifique peut être trouvé. Dans cette méthode, des anticorps avec différents épitopes qui visent le même antigène sont utilisés. Dans le cas d'un anticorps spécifique, les anticorps expliquent des résultats équivalents avec le grippement limité de hors circuit-objectif. Cependant, cette méthode est laborieuse et coûteuse et exige un deuxième anticorps avec un épitope différent.

Validation recombinée d'expression

Dans cette méthode, les niveaux de la protéine cible sur-sont exprimés, ou une version fluorescent marquée de la protéine est de manière endogène exprimée. Après l'anticorps marquant, les configurations de souillure sont avec celle de la protéine cible non modifiée.

Validation de milliseconde de saisie

En conclusion, cette méthode comporte la comparaison entre la capacité protéique et la souillure à celle des résultats de Mme de saisie.

De façon générale, la diversité de ces différentes méthodes permet à des scientifiques d'assurer l'aptitude de leurs anticorps pour des applications multiples. Par exemple, les anticorps pour l'immunocytochimie vérifient fréquemment avec l'expression génétique et recombinée et la validation indépendante d'anticorps, alors que ceux pour l'immunohistochimie souvent sont seulement vérifiés avec la validation orthogonale ou indépendante d'anticorps, et ceux pour la tache occidentale sont souvent vérifiées avec chacune des 5 méthodes de variation améliorées.

Further Reading

Last Updated: Jan 8, 2019

Hannah Simmons

Written by

Hannah Simmons

Hannah is a medical and life sciences writer with a Master of Science (M.Sc.) degree from Lancaster University, UK. Before becoming a writer, Hannah's research focussed on the discovery of biomarkers for Alzheimer's and Parkinson's disease. She also worked to further elucidate the biological pathways involved in these diseases. Outside of her work, Hannah enjoys swimming, taking her dog for a walk and travelling the world.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Simmons, Hannah. (2019, January 08). Comment est-ce que des anticorps sont validés ?. News-Medical. Retrieved on November 25, 2020 from https://www.news-medical.net/life-sciences/How-are-Antibodies-Validated.aspx.

  • MLA

    Simmons, Hannah. "Comment est-ce que des anticorps sont validés ?". News-Medical. 25 November 2020. <https://www.news-medical.net/life-sciences/How-are-Antibodies-Validated.aspx>.

  • Chicago

    Simmons, Hannah. "Comment est-ce que des anticorps sont validés ?". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/How-are-Antibodies-Validated.aspx. (accessed November 25, 2020).

  • Harvard

    Simmons, Hannah. 2019. Comment est-ce que des anticorps sont validés ?. News-Medical, viewed 25 November 2020, https://www.news-medical.net/life-sciences/How-are-Antibodies-Validated.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News Medical.