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¿Cómo se validan los anticuerpos?

Si un anticuerpo no es específico o bastante selectivo para su uso, atará a varios diversos epitopos, de tal modo reduciendo su exactitud y costando el tiempo y el dinero del laboratorio. La exactitud también se afecta si los anticuerpos del mismo fabricante o mezcla no generan resultados reproductivos.

Totales, estas entregas pueden llevar a los positivos falsos y al ruido de fondo excesivo, previniendo la detección de los resultados dominantes. Por lo tanto, en un proceso llamado validación del anticuerpo, los anticuerpos se prueban para asegurarse de que son selectivos, reproductivo, y específico bastante para su uso.

Ejemplo de un anticuerpo - representación de la bola y del bastón - por Kateryna KonKateryna Kon | Shutterstock

Al seleccionar un método de la validación del anticuerpo, el uso deseado del anticuerpo se debe considerar, con diversos usos requiriendo diversas formas de la validación. Apenas porque un anticuerpo es conveniente para el uso en borrar occidental no significa que es conveniente para un ELISA. Por lo tanto, muchos métodos diferentes están disponibles para la validación de anticuerpos, como se describe a continuación.

Validación estándar

Hay muchos diversos métodos tradicionales disponibles para la validación de anticuerpos. Por ejemplo, el borrar occidental, coloración immunohistochemical, inmunofluorescencia, espectroscopia en masa, y secuencia. Estos métodos son todos usados con frecuencia para asegurarse de que el antígeno correcto está seleccionado y de que hay reactividad cruzada mínima con otros antígenos.

Validación aumentada

Los recientes desarrollos han llevado a los métodos nuevos de validación del anticuerpo. Hay cinco pilares principales de validación aumentada, incluyendo:

Validación genética

En este método, el objetivo de la proteína se golpea abajo de utilizar uno de varios métodos diferentes (tales como CRISPR o siRNA). Comparación entre el anticuerpo que mancha antes y después de que el golpe de gracia entonces demuestra la especificidad y la selectividad del anticuerpo, pues un anticuerpo altamente específico no demostrará ninguna coloración de seguir el golpe de gracia de la proteína.

Validación ortogonal

En este método, la cantidad de detección de la proteína vía la etiqueta del anticuerpo se compara a la cantidad descubierta vía un método de la anticuerpo-independiente. Si la misma configuración se observa en ambos métodos, después el anticuerpo es conveniente para el uso. Sin embargo, si es diferente, esto demuestra una entrega con especificidad y selectividad.

Validación independiente del anticuerpo

El uso de un segundo, anticuerpo previamente validado es otra manera por la cual el atascamiento no específico puede ser descubierto. En este método, los anticuerpos con diversos epitopos que apunten el mismo antígeno se utilizan. En el caso de un anticuerpo específico, los anticuerpos demuestran resultados idénticos con el atascamiento limitado del lejos-objetivo. Sin embargo, este método es laborioso y costoso y requiere un segundo anticuerpo con un diverso epitopo.

Validación recombinante de la expresión

En este método, los niveles de la proteína del objetivo sobre-se expresan, o una versión fluorescente etiqueta de la proteína endógeno se expresa. Después del anticuerpo etiqueta, las configuraciones de coloración se comparan con la de la proteína sin modificar del objetivo.

Validación del ms de la captura

Finalmente, este método implica la comparación entre la talla de la proteína y la mancha de óxido a la de resultados del ms de la captura.

Total, la diversidad de estos métodos diferentes permite que los científicos aseguren la conveniencia de sus anticuerpos para los usos múltiples. Por ejemplo, los anticuerpos para immunocytochemistry están probando con frecuencia con la expresión genética, recombinante y la validación del anticuerpo de la independiente, mientras que ésos para el immunohistochemistry a menudo se prueban solamente con la validación ortogonal o independiente del anticuerpo, y ésas para la mancha blanca /negra occidental se prueban a menudo con los 5 métodos de variación aumentados.

Fuentes

Further Reading

Last Updated: Jan 8, 2019

Hannah Simmons

Written by

Hannah Simmons

Hannah is a medical and life sciences writer with a Master of Science (M.Sc.) degree from Lancaster University, UK. Before becoming a writer, Hannah's research focussed on the discovery of biomarkers for Alzheimer's and Parkinson's disease. She also worked to further elucidate the biological pathways involved in these diseases. Outside of her work, Hannah enjoys swimming, taking her dog for a walk and travelling the world.

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