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Comment analyser Necroptosis cellulaire

Necroptosis est une forme neuf caractérisée de la mort cellulaire qui a les propriétés assimilées à l'apoptose et à la nécrose. Necroptosis a été associé aux conditions variées de la maladie, pour cette raison la recherche et l'analyse des cellules subissant cette voie de mort cellulaire est indispensable.

Crédit d'image : Vshivkova/Shutterstock

Quel est necroptosis ?

Necroptosis est une forme de la mort cellulaire programmée, discernée en rompant de la membrane cellulaire, gonflement des organelles, et effusion des éléments cellulaires internes. Cette forme de la mort cellulaire se produit quand l'apoptose ne peut pas être effectué, par exemple quand la protéase de la caspase 8 est empêchée par le virus de la vaccine.

La voie de ce procédé a été considérable caractérisée et est hautement réglée. De façon générale, l'alpha (TNFα) signalisation de facteur de nécrose tumorale a comme conséquence l'activation de la kinase de interaction 1 (RIPK) de récepteur, le recrutement de RIPK 3, la formation du necrosome, et la phosphorylation et l'oligomérisation de la kinase mélangée de lignée comme un domaine (MLKL). Cette forme activée des garnitures intérieures de MLKL éventuel dans la membrane cellulaire et mène au permeabilization et à la mort de la cellule.

Cette voie est très importante dans la recherche car on lui a récent proposé comme centre d'intérêt possible pour le traitement contre le cancer. Un des cachets principaux du cancer est l'évasion de l'apoptose, qui a comme conséquence les cellules immortelles qui éludent la mort cellulaire. Par conséquent, on lui a récent proposé que l'activation du necroptosis en cellules de cancer-détail pourrait aider à surmonter cette résistance.

Il y a également beaucoup de maladies dans lesquelles le necroptosis est impliqué, y compris la rappe et l'infarctus du myocarde. Par conséquent, il est très important que les chercheurs puissent analyser et caractériser des cellules subissant le necroptosis. De tels efforts ont mené à plusieurs différents mécanismes pour les étudier, comme décrit ci-dessous.

Trouver la présence du necroptosis par l'intermédiaire des biomarqueurs

Un biomarqueur est une substance qui est présente à un organisme vivant qui peut être mesuré pour analyser un procédé biologique. Il y a beaucoup de différents biomarqueurs qui ont été utilisés pour indiquer la présence du necroptosis dans in vitro et in vivo des études.

Par exemple, plusieurs études in vitro ont recensé le composé RIPK1/3 par l'analyse d'immunoprécipitation et de microscopie électronique, qui indique la présence du necrosome et, à leur tour, la présence du necroptosis.

Supplémentaire, l'activation de RIPK1 peut être trouvée par éponger occidental contre hRIP1 phosphorylé à S166. Troisièmement, l'activation de RIPK3 peut être recensée par le dépistage occidental de tache de mRTP3 phosphorylé à S232. Une autre méthode fréquemment utilisée est par le dépistage de l'activité de la caspase 8, qui propose que le necroptosis ne se produise pas.

Cependant, le plus précis et, en conséquence, la plupart des techniques important d'analyse in vitro de necroptosis sont des mesures de phosphorylation, d'oligomérisation ou de translocation de MKLK. Ceci peut être effectué par l'intermédiaire du dépistage des biomarqueurs variés - comprenant MLKL phosphorylé à T357/S358 par éponger ou immunoprécipitation occidental, dépistage de MLKL oligomerized par éponger occidental ou par dépistage de la localisation de MLKL par l'immunohistochimique, respectivement.

En outre, il y a également des biomarqueurs d'immunohistochimie qui ont été employés in vivo pour recenser le necroptosis dans les études cliniques et des modèles animaux (par exemple, dépistage de hMLKL phosphorylé à Thr357 et à Ser358). Ceci peut expliquer que le necroptosis se produit dans les prélèvements de tissu, qu'en particulier les aides recherchent dans les maladies où le necroptosis est impliqué. Par exemple, une étude récente a prouvé que le necroptosis est activé dans les lésions corticales des patients présentant la sclérose en plaques.

L'utilisation des inhibiteurs de necroptosis pour l'analyse purposes

Une autre voie d'analyser le necroptosis est en empêchant le procédé, indiquant si la forme spécifique de la mort cellulaire impliquée dans la maladie est necroptosis.

Il y a plusieurs différents types d'inhibiteurs fréquemment utilisés. Ceux-ci comprennent des inhibiteurs de RIPK1, tels que Necrostatin-1 et 7-Cl-O-Nec-1. Cette méthode, cependant, n'est pas la plus fiable puisque Nec1 a hors de l'activité d'objectif et RIPK1 est également impliqué dans l'apoptose.

D'autres inhibiteurs fréquemment utilisés dans l'analyse du necroptosis comprennent GSK-872, qui empêche RIPK3, et necrosulfonamide, qui empêche MLKL.

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Last Updated: Feb 26, 2019

Hannah Simmons

Written by

Hannah Simmons

Hannah is a medical and life sciences writer with a Master of Science (M.Sc.) degree from Lancaster University, UK. Before becoming a writer, Hannah's research focussed on the discovery of biomarkers for Alzheimer's and Parkinson's disease. She also worked to further elucidate the biological pathways involved in these diseases. Outside of her work, Hannah enjoys swimming, taking her dog for a walk and travelling the world.

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