Como analisar Necroptosis celular

Necroptosis é um formulário recentemente caracterizado da morte celular que tem propriedades similares ao apoptosis e à necrose. Necroptosis foi associado com os vários estados da doença, conseqüentemente a pesquisa e a análise das pilhas que submetem-se a este caminho da morte celular são vitais.

Crédito de imagem: Vshivkova/Shutterstock

Que é necroptosis?

Necroptosis é um formulário da morte celular programada, distinguido rompendo da membrana de pilha, inchação dos organelles, e derramamento de componentes celulares internos. Este formulário da morte celular ocorre quando o apoptosis não pode ser realizado, por exemplo quando o protease do caspase 8 está inibido pelo vírus da varíola bovina.

O caminho deste processo extensivamente foi caracterizado e é altamente controlado. Total, a sinalização alfa do factor de necrose de tumor (TNFα) conduz à activação da quinase de interacção 1 (RIPK) do receptor, o recrutamento de RIPK 3, a formação do necrosome, e a fosforilação e o oligomerization de quinase misturada da linhagem domínio-como (MLKL). Este formulário ativado de inserções de MLKL finalmente na membrana de pilha e conduz ao permeabilization e à morte da pilha.

Este caminho é muito importante na pesquisa porque se tem sugerido recentemente como uma área de interesse possível para o tratamento contra o cancro. Uma das indicações principais do cancro é a evasão do apoptosis, que conduz às pilhas imortais que iludem a morte celular. Conseqüentemente, tem-se sugerido recentemente que a activação do necroptosis em pilhas cancro-específicas poderia ajudar a superar esta resistência.

Há igualmente muitas doenças em que o necroptosis é implicado, incluindo o curso e o enfarte do miocárdio. Conseqüentemente, é muito importante que os pesquisadores podem analisar e caracterizar as pilhas que se submetem ao necroptosis. Tais esforços conduziram a diversos mecanismos diferentes para estudá-los, como descrito abaixo.

Detectando a presença de necroptosis através dos biomarkers

Um biomarker é uma substância que este presente em um organismo vivo que possa ser determinado para analisar um processo biológico. Há muitos biomarkers diferentes que foram utilizados para indicar a presença de necroptosis em in vitro e in vivo estudos.

Por exemplo, diversos in vitro estudos identificaram o complexo RIPK1/3 com a imunoprecipitação e a análise da microscopia de elétron, que indica a presença do necrosome e, por sua vez, a presença de necroptosis.

Adicionalmente, a activação de RIPK1 pode ser detectada com da mancha ocidental contra hRIP1 phosphorylated em S166. Em terceiro lugar, a activação de RIPK3 pode ser identificada com a detecção ocidental da mancha de mRTP3 phosphorylated em S232. Um outro método usado freqüentemente é com a detecção de actividade do caspase 8, que sugere que o necroptosis não esteja ocorrendo.

Contudo, de métodos os mais exactos e, conseqüentemente, a maioria os mais importantes in vitro da análise do necroptosis são medidas da fosforilação, do oligomerization ou da translocação de MKLK. Isto pode ser realizado através da detecção de vários biomarkers - incluindo MLKL phosphorylated em T357/S358 com da mancha ou a imunoprecipitação ocidental, detecção de MLKL oligomerized com da mancha ocidental ou com a detecção de localização de MLKL com immunostaining, respectivamente.

Além disso, há igualmente os biomarkers do immunohistochemistry que foram usados in vivo para identificar o necroptosis em estudos clínicos e nos modelos animais (por exemplo, detecção de hMLKL phosphorylated em Thr357 e em Ser358). Isto pode demonstrar que o necroptosis está ocorrendo em amostras de tecido, que ajuda particularmente à pesquisa nas doenças onde o necroptosis é implicado. Por exemplo, um estudo recente mostrou que o necroptosis está activado em lesões corticais dos pacientes com esclerose múltipla.

O uso de inibidores do necroptosis para a análise purposes

Uma outra maneira de analisar o necroptosis é com da inibição do processo, revelando se o formulário específico da morte celular implicado na doença é necroptosis.

Há diversos tipos diferentes de inibidores usados freqüentemente. Estes incluem inibidores de RIPK1, tais como Necrostatin-1 e 7-Cl-O-Nec-1. Este método, contudo, não é o mais seguro desde que Nec1 tem fora da actividade do alvo e RIPK1 é envolvido igualmente no apoptosis.

Outros inibidores usados freqüentemente na análise do necroptosis incluem GSK-872, que inibe RIPK3, e necrosulfonamide, que inibe MLKL.

Fontes:

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Last Updated: Feb 26, 2019

Hannah Simmons

Written by

Hannah Simmons

Hannah is a medical and life sciences writer with a Master of Science (M.Sc.) degree from Lancaster University, UK. Before becoming a writer, Hannah's research focussed on the discovery of biomarkers for Alzheimer's and Parkinson's disease. She also worked to further elucidate the biological pathways involved in these diseases. Outside of her work, Hannah enjoys swimming, taking her dog for a walk and travelling the world.

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