Cómo analizar Necroptosis celular

Necroptosis es una forma nuevamente caracterizada de la muerte celular que tiene propiedades similares al apoptosis y a la necrosis. Necroptosis se ha asociado a los diversos estados de la enfermedad, por lo tanto la investigación y el análisis de las células que experimentan este camino de la muerte celular es vitales.

Haber de imagen: Vshivkova/Shutterstock

¿Cuál es necroptosis?

Necroptosis es una forma de la muerte celular programada, distinguida rompiendo de la membrana celular, hinchamiento de los organelos, y derramamiento de componentes celulares internos. Esta forma de la muerte celular ocurre cuando el apoptosis no puede ser realizado, por ejemplo cuando la proteasa del caspase 8 es inhibida por el virus de la vacuna.

El camino de este proceso se ha caracterizado y es extensivamente altamente controlado. Total, la transmisión de señales alfa del factor de necrosis de tumor (TNFα) da lugar a la activación de la cinasa que obra recíprocamente 1 (RIPK) del receptor, reclutamiento de RIPK 3, formación del necrosome, y la fosforilación y la oligomerización de la cinasa mezclada del linaje dominio-como (MLKL). Esta forma activada de las piezas insertas de MLKL final en la membrana celular y lleva al permeabilization y a la muerte de la célula.

Este camino es muy importante en la investigación pues se ha sugerido recientemente como campo de interés posible para el tratamiento contra el cáncer. Uno de los sellos principales del cáncer es la evasión del apoptosis, que da lugar a las células inmortales que evaden muerte celular. Por lo tanto, se ha sugerido recientemente que la activación del necroptosis en células cáncer-específicas podría ayudar a vencer esta resistencia.

Hay también muchas enfermedades en las cuales se implica el necroptosis, incluyendo recorrido y el infarto del miocardio. Por lo tanto, es muy importante que los investigadores pueden analizar y caracterizar las células que experimentan necroptosis. Tales esfuerzos han llevado a varios diversos mecanismos para estudiarlos, como se describe a continuación.

Descubrir la presencia de necroptosis vía biomarkers

Un biomarker es una substancia que está presente en un organismo vivo que se pueda cuantificar para analizar un proceso biológico. Hay muchos diversos biomarkers que se han utilizado para indicar la presencia de necroptosis en in vitro y in vivo los estudios.

Por ejemplo, varios estudios ines vitro determinaron el complejo RIPK1/3 con la inmunoprecipitación y el análisis de la microscopia electrónica, que indica la presencia del necrosome y, a su vez, la presencia de necroptosis.

Además, la activación de RIPK1 se puede descubrir con borrar occidental contra hRIP1 phosphorylated en S166. En tercer lugar, la activación de RIPK3 se puede determinar con la detección occidental de la mancha blanca /negra de mRTP3 phosphorylated en S232. Otro método usado con frecuencia está con la detección de la actividad del caspase 8, que sugiere que no esté ocurriendo el necroptosis.

Sin embargo, de los métodos más exactos y, por lo tanto, la mayoría más importantes de análisis in vitro del necroptosis son mediciones de la fosforilación, de la oligomerización o del desplazamiento de MKLK. Esto se puede realizar vía la detección de diversos biomarkers - incluyendo MLKL phosphorylated en T357/S358 con borrar o la inmunoprecipitación occidental, detección de MLKL oligomerized con borrar occidental o con la detección de la localización de MLKL con immunostaining, respectivamente.

Además, hay también los biomarkers del immunohistochemistry que se han utilizado in vivo para determinar necroptosis en estudios clínicos y modelos animales (por ejemplo, detección del hMLKL phosphorylated en Thr357 y Ser358). Esto puede demostrar que el necroptosis está ocurriendo en las muestras de tejido, que determinado los ayudantes investigan sobre las enfermedades donde se implica el necroptosis. Por ejemplo, un estudio reciente ha mostrado que el necroptosis está activado en lesiones corticales de pacientes con esclerosis múltiple.

El uso de los inhibidores del necroptosis para el análisis purposes

Otra manera de analizar necroptosis está con la inhibición del proceso, revelando si la forma específica de la muerte celular implicada en enfermedad es necroptosis.

Hay varios diversos tipos de inhibidores usados con frecuencia. Éstos incluyen los inhibidores de RIPK1, tales como Necrostatin-1 y 7-Cl-O-Nec-1. Este método, sin embargo, no es el más seguro puesto que Nec1 tiene de actividad del objetivo y RIPK1 también está implicado en apoptosis.

Otros inhibidores usados con frecuencia en el análisis del necroptosis incluyen GSK-872, que inhibe RIPK3, y el necrosulfonamide, que inhibe MLKL.

Fuentes:

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Last Updated: Feb 26, 2019

Hannah Simmons

Written by

Hannah Simmons

Hannah is a medical and life sciences writer with a Master of Science (M.Sc.) degree from Lancaster University, UK. Before becoming a writer, Hannah's research focussed on the discovery of biomarkers for Alzheimer's and Parkinson's disease. She also worked to further elucidate the biological pathways involved in these diseases. Outside of her work, Hannah enjoys swimming, taking her dog for a walk and travelling the world.

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