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Comment choisir un détail d'anticorps à l'application

Quels sont des anticorps et comment elles sont employés dans la recherche ?

Les anticorps sont des protéines fabriquées par les cellules de B dans les systèmes immunitaires des formes de durée plus élevée comme caractéristique adaptative pour permettre au fuselage d'adresser les molécules étrangères de envahissement qui constituent un danger à l'organisme. Le fonctionnement naturel des anticorps comporte leur pièce d'assemblage aux antigènes (appartenant aux corps étrangers de envahissement), pour les marquer pour la destruction par le système immunitaire.

anticorpsCrédits d'image : Design_Cells/Shutterstock.com

Cette propension innée de se fixer aux molécules spécifiques a déterminé leur utilisation dans la recherche scientifique. Puisqu'on peut choisir des anticorps spécifiques qui sont connus pour enclencher sur certains antigènes, les chercheurs peuvent employer des anticorps pour recenser la présence de certaines substances. En conséquence, l'utilisation des anticorps est devenue fortement comptée au moment dans l'étude du fonctionnement de protéine en cellules.

On a développé des techniques nombreuses qui exploitent la nature des anticorps afin de vérifier des protéines en cellules et tissus. Les applications telles que l'immunohistochimie, l'immunocytochimie, la tache occidentale, l'ELISA, la cytométrie de flux et le FACS, et l'ELISPOT, sont toutes les méthodes déterminées qui utilisent des anticorps.

Afin de tirer le meilleur de ces techniques investigatrices puissantes, il est essentiel qu'on choisit l'anticorps correct qui adapte à l'application spécifique. En dessous de nous discutons comment choisir l'anticorps correct pour votre application.

Choix de la bonne application

La première étape de choisir l'anticorps droit pour votre expérience est de s'assurer que vous sélectez l'application correcte qui est la plus adaptée pour vos recherches. Ci-après, nous donnons les principales caractéristiques des méthodes variées :

Demandes d'étudier la localisation

L'immunohistochimie a un bas au débit moyen, peut être employée pour les cellules et les tissus fixes, peut produire la localisation cellulaire, a une résolution spatiale élevée, se concentre type sur une protéine unique, peut les protéines multiples d'image immédiatement, et est qualitative et semi-quantitative.

L'autre technique qui étudie la localisation est immunocytochimie. Cette technique a un bas au débit élevé, peut être employée pour les cellules et les tissus fixes, peut produire la localisation sous-cellulaire, elle peut les protéines multiples d'image immédiatement, et est qualitative et semi-quantitative. Cependant, sa résolution spatiale est limitée par la structure de tissu.

Demandes d'étudier la concentration

La tache occidentale est la technique appropriée pour étudier la concentration protéique. Elle a un bas au débit moyen, peut être employée pour des lysates de cellules et de tissu, produit des taux de protéine relatifs, peut déterminer le poids moléculaire, les isoforms et les modifications goujon-de translation, et est semi-quantitative.

Demandes d'étudier l'interaction

L'ELISA est la technique appropriée pour étudier des interactions de protéines. La méthode a un support au débit élevé (plaque de 96 puits), il peut être employée pour étudier le sérum/plasma, sous tension ou les cellules et le tissu fixes, elle produit les taux de protéine précis, elle est quantitative et qualitative.

Demandes d'étudier l'expression

L'ELISA peut également être employé pour étudier l'expression, ses caractéristiques sont donnés ci-dessus. La cytométrie de flux et le FACS est la technique alternative d'étudier l'expression. Elle a un bas au débit élevé (jusqu'à 384 plaques bonnes). Elle peut être employée pour les cellules fixes ou sous tension et peut déterminer les propriétés chimiques et physiques telles que la taille, l'expression des bornes extérieures, et plus. Elle peut être employée pour mesurer et trier les cellules (FACS). En conclusion, c'est une méthode quantitative.

Demandes d'étudier l'identification

ELISPOT peut être employé en étudiant l'identification. Il a un support au débit élevé (plaque de 96 puits) et peut être employé sur les cellules sous tension. Il peut recenser les cellules spécifiques sécrétant une analyte d'intérêt et a une sensibilité élevée. Il peut être quantitatif et qualitatif.

Sélecter l'anticorps primaire

En sélectant l'anticorps primaire, le type correct, monoclonal ou polyclonal, doit être considéré.

Les anticorps monoclonaux identifient seulement un épitope unique sur l'antigène, ils produisent de moins de bruit de fond car ils sont moins croix-pour réagir avec d'autres protéines. En outre, leur homogénéité est très élevée, signifiant que la variabilité entre les lots est inférieure.

Ils sont également extrêmement efficaces à gripper avec de l'antigène dans un mélange des molécules relatives. Cependant, ils ne travaillent pas dans une gamme complète de substance due à elles étant trop spécifiques. Ils sont également vulnérables à la perte d'épitope par la demande de règlement chimique de l'antigène.

D'autre part, les caractéristiques des anticorps polyclonaux sont comme suit : Elles identifient des épitopes multiples sur n'importe quel un antigène, elles ont une affinité élevée et peuvent aider à amplifier le signe des protéines inférieures d'expression, elles sont plus tolérantes aux modifications mineures à l'antigène, et elles peuvent être employées pour trouver des protéines des substances autres que celle de l'immunogénicité. Cependant, les désavantages sont qu'ils sont à variabilité encline de lot-à-lot et peuvent produire un signe de mouvement propre.

Sélecter l'anticorps secondaire

Le type de méthode étant employée avisera quel anticorps secondaire convient. En dessous de nous donnons ces types qui sont utilisables pour la technique.

- IHC : HRP ou AP-conjugué, éclat, biotinylated (avidine/streptavidin conjugué à l'enzyme ou au fluorochrome), fluorochromes tels que des teintures d'Alexa Fluor®, de Cy®, FITC, et PE, et pré-adsorbé.

- ICC : Anticorps d'éclat, biotinylated (avidine/streptavidin conjugué au fluorochrome), fluorochromes tels que des teintures d'Alexa Fluor®, de Cy®, FITC, et PE, et pré-adsorbé.

- Tache occidentale : HRP ou AP-conjugué, biotinylated (avidine/streptavidin conjugué à l'enzyme), fluorochromes tels qu'Alexa Flour® (Alexa 680 et Alexa 790), anticorps spécifiques VeriBlot de réseau léger pour l'IP.

- ELISA et ELISPOT : HRP ou AP-conjugué, biotinylated (avidine/streptavidin conjugué à l'enzyme), monoclonal (particulièrement anticorps de sous-type-détail tels qu'anti-IgG1)

- Cytométrie de flux et FACS : Fluorochromes tels que des teintures d'Alexa Fluor®, de Cy®, FITC, et PE, biotinylated (avidine/streptavidin conjugué au fluorochrome), éclat monoclonal 2, de F (ab'), et des anticorps primaires conjugués pour maximiser le rendement de temps.

Sources :

Dowd, S., Halonen, M. et Maier, R. (2009). Méthodes immunologiques. Microbiologie environnementale, pp.225-241. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123705198000122

Murata, L., Brunhoeber, P., Clements, J., ElGabry, E., Feng, J., Kapadia, M., Mistry, A., Singh, S. et promenade, E. (2019). Immunohistochimie. Accouplement et diagnose complémentaire, pp.53-91. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128135396000043

Pillot, J. (1996). L'année de Pasteur : du concept de l'anticorps et de l'antigène par Bordet (1895) à l'ELISA. Quel contrat à terme pour le diagnostic immunologique ?. Virologie clinique et diagnostique, 5 (2 ou 3), pp.191-196. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0928019796002218

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Last Updated: Mar 10, 2020

Sarah Moore

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Sarah Moore

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