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Cómo elegir un específico del anticuerpo al uso

¿Cuáles son anticuerpos y cómo ellos se utilizan en la investigación?

Los anticuerpos son proteínas manufacturadas por las células de B dentro de los sistemas inmunes de las formas de una vida más alta como característica adaptante para permitir que la carrocería dirija las moléculas no nativas invasoras que plantean una amenaza para el organismo. La función natural de anticuerpos implica su agregación a los antígenos (que pertenecen a los cuerpos extraños invasores), para señalarlos por medio de una bandera para la destrucción por el sistema inmune.

anticuerposHaber de imagen: Design_Cells/Shutterstock.com

Esta propensión natural a sujetarse a las moléculas específicas ha establecido su uso en la investigación científica. Porque los anticuerpos específicos pueden ser elegidos que se saben para cerrar sobre ciertos antígenos, los investigadores pueden utilizar los anticuerpos para determinar la presencia de ciertas substancias. Por lo tanto, el uso de anticuerpos se ha confiado pesado sobre en el estudio de la función de la proteína en células.

Se han desarrollado las técnicas numerosas que explotan la naturaleza de anticuerpos para investigar las proteínas en células y tejidos. Los usos tales como mancha blanca /negra del immunohistochemistry, immunocytochemistry, occidentales, ELISA, cytometry de flujo y FACS, y ELISPOT, son todos los métodos establecidos que utilizan los anticuerpos.

Para hacer la mayor parte de las estas técnicas investigadores potentes, es esencial que el anticuerpo correcto está elegido que se adapta al uso específico. Abajo de nosotros discutimos cómo elegir el anticuerpo correcto para su uso.

Elegir el uso correcto

El primer paso de elegir el anticuerpo derecho para su experimento es asegurarse que usted selecciona el uso correcto que es el más conveniente para sus propósitos de la investigación. Abajo, contorneamos las características principales de los diversos métodos:

Usos para estudiar la localización

El Immunohistochemistry tiene un ciclón a la producción mediana, se puede utilizar para las células y los tejidos fijos, puede producir la localización celular, tiene una alta resolución espacial, se centra típicamente en una única proteína, puede las proteínas múltiples de la imagen inmediatamente, y es cualitativo y semiquantitativo.

La otra técnica que estudia la localización es immunocytochemistry. Esta técnica tiene un ciclón a la alta producción, se puede utilizar para las células y los tejidos fijos, puede producir la localización subcelular, puede las proteínas múltiples de la imagen inmediatamente, y es cualitativa y semiquantitativa. Sin embargo, su resolución espacial es limitada por la estructura del tejido.

Usos para estudiar la concentración

La mancha blanca /negra occidental es la técnica apropiada para estudiar la concentración de la proteína. Tiene un ciclón a la producción mediana, puede ser utilizada para los lysates de la célula y del tejido, genera niveles relativos de la proteína, puede establecer el peso molecular, isoforms y modificaciones poste-de translación, y es semiquantitativa.

Usos para estudiar la acción recíproca

ELISA es la técnica apropiada para estudiar acciones recíprocas de la proteína. El método tiene un ambiente a la alta producción (placa de 96 pozos), él se puede utilizar para estudiar el suero/el plasma, vivo o las células y tejido fijos, produce niveles exactos de la proteína, es cuantitativo y cualitativo.

Usos para estudiar la expresión

ELISA puede también ser utilizado para estudiar la expresión, sus características se contornea arriba. El cytometry de flujo y FACS es la técnica alternativa de estudiar la expresión. Tiene un ciclón a la alta producción (hasta 384 placas bien). Puede ser utilizada para las células fijas o vivas y puede determinar propiedades químicas y físicas tales como talla, expresión de los marcadores superficiales, y más. Puede ser utilizada para cuantificar y para clasificación las células (FACS). Finalmente, es un método cuantitativo.

Usos para estudiar la identificación

ELISPOT puede ser utilizado al estudiar la identificación. Tiene un ambiente a la alta producción (placa de 96 pozos) y puede ser utilizado en las células vivas. Puede determinar las células específicas que secretan un analito del interés y tiene una alta sensibilidad. Puede ser cuantitativo y cualitativo.

Selección del anticuerpo primario

Al seleccionar el anticuerpo primario, el tipo correcto, monoclonal o policlonal, debe ser considerado.

Los anticuerpos monoclonales reconocen solamente un único epitopo en el antígeno, ellos generan menos ruido de fondo pues son menos probables cruz-reaccionar con otras proteínas. También, su homogeneidad es muy alta, significando que la variabilidad entre las mezclas es inferior.

Son también extremadamente eficientes en atar con el antígeno dentro de una mezcla de moléculas relacionadas. Sin embargo, no trabajan en una gama completa de especie debido a ella que es demasiado específica. También son vulnerables a la baja del epitopo con el tratamiento químico del antígeno.

Por otra parte, las características de anticuerpos policlonales son como sigue: Reconocen epitopos múltiples en cualquier un antígeno, tienen una alta afinidad y pueden ayudar a amplificar la señal de las proteínas inferiores de la expresión, son más tolerantes a los cambios de menor importancia al antígeno, y pueden ser utilizadas para descubrir las proteínas de especies con excepción del de la inmunogeneticidad. Sin embargo, las desventajas son que son variabilidad propensa de la mezcla-a-mezcla y pueden producir una señal de fondo.

Selección del anticuerpo secundario

El tipo de método que es utilizado informará a qué anticuerpo secundario es conveniente. Abajo de nosotros contorneamos esos tipos que sean usables para la técnica.

- IHC: HRP o AP-conjugado, fragmento, biotinylated (avidina/streptavidin conjugado a la enzima o al fluorocromo), fluorocromos tales como tintes de Alexa Fluor®, de Cy®, FITC, y PE, y pre-adsorbido.

- ICC: Anticuerpos del fragmento, biotinylated (avidina/streptavidin conjugado al fluorocromo), fluorocromos tales como tintes de Alexa Fluor®, de Cy®, FITC, y PE, y pre-adsorbidos.

- Mancha blanca /negra occidental: HRP o AP-conjugado, biotinylated (avidina/streptavidin conjugado a la enzima), fluorocromos tales como Alexa Flour® (Alexa 680 y Alexa 790), anticuerpos específicos VeriBlot de la cadena liviana para el IP.

- ELISA y ELISPOT: HRP o AP-conjugado, biotinylated (avidina/streptavidin conjugado a la enzima), monoclonal (especialmente anticuerpos subtipo-específicos tales como anti-IgG1)

- Cytometry de flujo y FACS: Fluorocromos tales como tintes de Alexa Fluor®, de Cy®, FITC, y PE, biotinylated (avidina/streptavidin conjugado al fluorocromo), fragmento monoclonal, de F 2 (ab'), y anticuerpos primarios conjugados para maximizar eficiencia del tiempo.

Fuentes:

Dowd, S., Halonen, M. y Maier, R. (2009). Métodos inmunológicos. Microbiología ambiental, pp.225-241. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123705198000122

Murata, L., Brunhoeber, P., Clements, J., ElGabry, E., Feng, J., Kapadia, M., Mistry, A., Singh, S. y paseo, E. (2019). Immunohistochemistry. Compañero y diagnósticos complementarios, pp.53-91. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128135396000043

Pillot, J. (1996). El año de Pasteur: del concepto de anticuerpo y de antígeno por Bordet (1895) al ELISA. Qué futuro para la diagnosis inmunológica?. Virología clínica y diagnóstica, 5 (2-3), pp.191-196. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0928019796002218

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Last Updated: Mar 10, 2020

Sarah Moore

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Sarah Moore

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