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Como apresentar dados do Cytometry de fluxo em uma publicação

O cytometry de fluxo é uma técnica baseada no laser amplamente utilizada que possa ser usada para medir e determinar o tamanho de pilha, a granulosidade da pilha, marcadores celulares, e componentes intracelulares tais como proteínas e nucleotides. Esta técnica analítica fornece a análise simultânea do multiparâmetro que pode ser usada para apoiar conclusões em publicações científicas.

pilhas para a análise usando o cytometry de fluxo - uma ilustração por Peeradach RPeeradach R | Shutterstock

Factores essenciais a considerar antes de publicar dados do cytometry de fluxo

Preparação experimental estabelecido e da amostra

Antes de submeter uma publicação, é crucial que os autores incluem uma descrição detalhada do projecto experimental. Esta descrição deve incluir o número de experiências independentes que foram executadas durante o estudo e o número de amostras analisadas durante cada experiência. A preparação das suspensões das amostras ou das pilhas analisadas pelo cytometry de fluxo deve igualmente ser explicada.

Os métodos da preparação do cytometry de fluxo incluem o uso de proteases específicos para o isolamento, filtragem e lysis de qualquer tipo particular da pilha, assim como reagentes do permeabilization e da fixação. Esta informação assegura a reprodutibilidade e ajuda a outros pesquisadores nas experiências futuras.

Por aquisição de dados

A metodologia e os parâmetros usados para o cytometry de fluxo por aquisição de dados devem incluir o fabricante de equipamento, modelo, software, lasers e ajustes de potência do laser, assim como os filtros da emissão óptica que foram usados para cada reagente fluorescente.

A compensação ou os processos matemáticos da correcção para eliminar a sobreposição espectral entre os fluorochromes devem igualmente ser descritos. Além disso, as estratégias de máscara exactas, tais como o uso de determinadas características de software igualmente melhoram a reprodutibilidade das experiências.

O tamanho da amostra ou o número de pilhas contadas na população do interesse e o número mínimo de eventos para uma população de alvo devem igualmente ser indicados.

Análise dos dados obtidos e da apresentação

A análise de dados cuidadosa da vasta quantidade de informação obtida do cytometry de fluxo é uma parte crucial de toda a publicação.

Esquemas bloqueando

Quando descrever bloqueando os esquemas, aspectos tais como portas leves do scatter, portas vivo-inoperantes, portas da parelha e fluorescência-detectando portas dever ser endereçada.

Definindo pontos iniciais

É crítico que os autores incluem toda a informação em relação aos controles que foram usados. Estes incluem unstained, biológico, o isotipo, a fluorescência menos-um ou os controles negativos actuais dentro da suspensão da pilha.

Análise estatística

A análise estatística, incluindo se os dados representam uma comparação entre um meio, um número médio ou uma porcentagem, deve igualmente ser incluída.

Apresentando dados

Os autores podem escolher vários estilos da apresentação, tais como o ponto ou os lotes da densidade, destacar a população da pilha do interesse. Quando considerar o ponto traça, é importante etiquetar ambos os machados e inclui-los se uma escala linear ou logarítmica está sendo usada.

Igualmente recomendou que os anticorpos ou os fluorophores estão etiquetados directamente no lote. As porcentagens devem ser alistadas nas portas, visto que o número de eventos totais em um lote deve ser indicado no lote ou na figura legenda.

Normalização em dados do cytometry de fluxo

Apesar da vasta gama de aplicações do cytometry de fluxo, esta técnica foi examinada em sua reprodutibilidade devido à falta de métodos padrão comparar exactamente dados do cytometry de fluxo.

A complexidade dos dados justifica a necessidade para padrões mínimos. Os pesquisadores do cytometry de fluxo igualmente tirariam proveito de uma estrutura mais formalizada para esta técnica, incluindo directrizes em experimental e provam a informação, a aquisição, a análise, e a apresentação dos dados.

Conclusão

Para melhorar a reprodutibilidade dos dados obtidos da análise cytometric do fluxo e fazê-la fácil compreender para leitores, é essencial incluir explicações detalhadas de como a análise foi executada. Incluindo esta informação, os pesquisadores podem facilmente validar a qualidade dos dados e da conclusão tirados.

Fontes

Further Reading

Last Updated: Apr 3, 2019

Benedette Cuffari

Written by

Benedette Cuffari

After completing her Bachelor of Science in Toxicology with two minors in Spanish and Chemistry in 2016, Benedette continued her studies to complete her Master of Science in Toxicology in May of 2018. During graduate school, Benedette investigated the dermatotoxicity of mechlorethamine and bendamustine; two nitrogen mustard alkylating agents that are used in anticancer therapy.

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