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Comment afficher des chromatogrammes de LC-MS

Chromatographie liquide - la spectrométrie de masse (LC-MS) combine deux approches pour séparer et recenser des molécules ou des composés actuels dans un échantillon. La chromatographie liquide de haute performance (HPLC) sépare des composantes d'un mélange, alors que la spectrométrie de masse (MS) offre les outils de dépistage pour les recenser. LC-MS, comme méthode pour comprendre les molécules biologiques, a des applications dans la recherche et le diagnostic clinique.

Cependant, l'évaluation des chromatogrammes produits par cette méthode exige une compréhension principale de la façon dont LC-MS fonctionne.

Chromatogramme ordonnançant sur le guide. Crédit d
Chromatogramme ordonnançant sur le guide. Crédit d'image : photo/Shutterstock de la science

Méthode de LC-MS

Avant que la CLHP ait été être répandu largement, et toujours commencé aujourd'hui, la chromatographie gazeuse (GC) est souvent utilisée. L'idée d'accoupler une technique pour séparer des composantes d'un mélange, telles que la CLHP ou la CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE, avec la milliseconde pour analyser ces composantes est entrée pendant les années 1950.

La CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE et la milliseconde ont été combinées comme GC-MS, une technique qui encore est couramment appliquée dans la biologie clinique pour examiner les mélanges complexes pour l'identification des substances connues, par exemple, déterminer des médicaments en urine. LC-MS a été développé plus tard, pendant les années 1980. Le retard en combinant les deux approches était dû aux difficultés initiales avec la source d'ions de milliseconde et au flot liquide de la CLHP. La solution au problème et la viabilité suivante de LC-MS ont gagné à John Fenn le prix Nobel.

LC-MS commence par la CLHP, où un liquide est réussi par un fléau. Dans ce fléau, des composantes sont séparées ont basé sur des interactions hydrophobes, l'échange ionique, ou d'autres caractéristiques variables. Seule la CLHP ne peut pas être employée pour l'identification, parce que les différentes molécules peuvent partager de soi-disant temps d'assemblage.

Le temps d'assemblage est le moment pris pour qu'un corps dissous réussisse par le fléau. Cette propriété peut être mise en commun entre plusieurs composantes d'un mélange, qui est pourquoi les méthodes de milliseconde sont appliquées. Le chromatogramme fourni du ce expositions le temps d'assemblage par l'intensité (quantité de présent de composante).

Une fois que séparées, les composantes sont converties en condition ionisée. La milliseconde emploie la masse au rapport de charge comme facteur de caractérisation pour recenser des composantes, ainsi la prochaine opération comporte la séparation des composantes basées sur ceci.

La masse au rapport de charge est plus spécifique à une molécule particulière que le temps d'assemblage dans la CLHP, celle est pourquoi la milliseconde est employée. Les analyseurs de la masse pour charger des différences, juste comme la technique de séparation dans la CLHP, peuvent différer, y compris des analyseurs tels que le quadrupôle, la période du vol, et la trappe d'ion.

Les ions apparaissants sont alors comptés par un détecteur. Le spectre donnant droit de milliseconde montre la masse au rapport de charge tracé contre l'intensité maximale.

Interpréter les chromatogrammes

Les chromatogrammes montrent des composantes car les fonctionnements de leur temps et masse d'assemblage au rapport de charge par l'abondance relative de masse, signifiant toute la sortie d'un plein LC-MS est un graphique avec deux haches horizontales. Le centre du graphique peut être modifié selon l'objectif du chercheur.

Le chromatogramme ne change pas pour une analyte, pour cette raison il peut souvent être employé comme empreinte digital pour des types de molécules.

Ceci est type fait en regardant où les crêtes du temps et de la masse d'assemblage au rapport de charge sont. De nos jours, la plupart des analyses des chromatogrammes sont faites de calcul. Ceci signifie qu'un logiciel comparera les chromatogrammes produits à connu afin de recenser les composantes, ou l'enregistre comme neuf découvertes.

Il y a plusieurs voies d'assurer le relevé correcte des chromatogrammes. Vu que les facteurs tels que des caractéristiques entraînant la séparation dans le LC, les méthodes d'ionisation, et les analyseurs de la masse au rapport de charge peuvent tout varier, se développant une réponse globale au traitement précis des chromatogrammes est dure. Quand des réglages de LC-MS sont appliqués pour couvrir une large gamme de composés, un profilage différentiel appelé de méthode, les opérations pour traiter déménagera par des étapes.

Le filtrage spectral vise à enlever le bruit dans les caractéristiques, facilitant de ce fait le dépistage des crêtes d'intérêt. La réduction du bruit peut également être optimisée pendant le LC-MS à l'aide des fléaux plus courts avec de plus petites dimensions des particules, entre d'autres méthodes.

Le dépistage maximal suit le filtrage, par lequel les crêtes représentent des composantes ou des fractures des composantes. Les crêtes peuvent être sélectées ont basé sur la hauteur ou le domaine qu'elles couvrent. Certaines configurations maximales peuvent être recensées par l'oeil, en appariant vers le haut des crêtes actuelles à connues. Ceci peut aider à déterminer quelles molécules sont présentes, ou combien d'atomes sont présents dans la molécule.

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Last Updated: Sep 19, 2018

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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