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Cómo leer cromatógramas de LC-MS

Cromatografía líquida - la espectrometría de masa (LC-MS) combina dos aproximaciones para separar y para determinar las moléculas o las composiciones presentes en una muestra. La cromatografía líquida del alto rendimiento (HPLC) separa componentes de una mezcla, mientras que la espectrometría de masa (MS) ofrece las herramientas de la detección para determinarlas. LC-MS, como método para entender las moléculas biológicas, tiene usos en la investigación y la diagnosis clínica.

Sin embargo, la interpretación de los cromatógramas generados con este método requiere una comprensión fundamental de cómo LC-MS trabaja.

Cromatógrama que ordena en diapositiva. Haber de imagen: foto/Shutterstock de la ciencia
Cromatógrama que ordena en diapositiva. Haber de imagen: foto/Shutterstock de la ciencia

Método de LC-MS

Antes de que la CLAR fuera extensamente, y todavía el ser utilizado comenzado hoy, la cromatografía de gas (GC) se emplea a menudo. La idea de acoplar una técnica para separar componentes de una mezcla, tales como CLAR o CROMATOGRAFÍA GASEOSA, con el ms para analizar esos componentes vino hacia adentro durante los años 50.

Combinaron la CROMATOGRAFÍA GASEOSA y al ms como GC-MS, una técnica que todavía se aplica común en biología clínica para revisar las mezclas complejas para la identificación de substancias sabidas, por ejemplo, prueba para las drogas en orina. LC-MS fue desarrollado más adelante, durante los años 80. El retraso en combinar las dos aproximaciones era debido a las dificultades iniciales con la fuente de ión del ms y a la corriente líquida de la CLAR. La solución a este problema y viabilidad subsiguiente de LC-MS ganó a Juan Fenn el Premio Nobel.

LC-MS comienza con la CLAR, en donde un líquido se pasa a través de una olumna. En esta olumna, se separan los componentes basaron en acciones recíprocas hidrofóbicas, intercambio de iones, u otras características variables. La CLAR solamente no se puede utilizar para la identificación, porque diversas moléculas pueden compartir supuestos tiempos de retención.

El tiempo de retención es la época llevada para que un soluto pase a través de la olumna. Esta propiedad se puede compartir entre varios componentes de una mezcla, que es porqué los métodos del ms son aplicados. El cromatógrama rendido de este demostraciones el tiempo de retención por la intensidad (periodo del presente del componente).

Una vez que están separados, los componentes se convierten a un estado ionizado. El ms utiliza la masa a la índice de carga como factor que caracteriza para determinar componentes, así que el paso siguiente implica la separación de componentes basados en esto.

La masa a la índice de carga es más específica a una molécula determinada que el tiempo de retención en la CLAR, por eso ms se emplea. Los analizadores de la masa para cargar diferencias, apenas como la técnica de separación en CLAR, pueden diferir, incluyendo analizadores tales como tetrapolo, época del vuelo, y trampa del ión.

Los iones emergentes entonces son contados por un detector. El espectro resultante del ms muestra la masa a la índice de carga trazada contra la intensidad máxima.

Interpretación de los cromatógramas

Los cromatógramas muestran componentes pues las funciones de su tiempo y masa de retención a la índice de carga por la abundancia relativa en masa, significando el rendimiento total de un LC-MS completo son un gráfico con dos hachas horizontales. El foco del gráfico se puede alterar dependiendo de la meta del investigador.

El cromatógrama no cambia para un analito, por lo tanto puede ser utilizado a menudo como huella dactilar para los tipos de moléculas.

Esto es hecha típicamente observando donde están los picos del tiempo y de la masa de retención a la índice de carga. Hoy en día, la mayoría de los análisis de cromatógramas se hacen de cómputo. Esto significa que un software comparará cromatógramas generados sabidos para determinar los componentes, o lo salva como nuevamente descubierto.

Hay varias maneras de asegurar la lectura apropiada de los cromatógramas. Se da que los factores tales como características que causan la separación en el LC, los métodos de la ionización, y los analizadores de la masa a la índice de carga pueden todos variar, convirtiéndose una respuesta global al tramitación exacto de cromatógramas duro. Cuando las fijaciones de LC-MS se aplican para revestir una amplia gama de composiciones, un método llamado perfilado diferenciado, los pasos para tramitar se moverá a través de escenarios.

La filtración espectral tiene como objetivo el quitar de ruido en los datos, de tal modo facilitando la detección de picos del interés. La reducción del nivel de ruidos se puede también optimizar durante LC-MS usando olumnas más cortas con tamaños de las partículas más pequeños, entre otros métodos.

La detección máxima sigue la filtración, por el que los picos representen componentes o fracturas de componentes. Los picos se pueden seleccionar sobre la base de altura o de área que revisten. Ciertas configuraciones máximas se pueden determinar por el aro, igualando encima de los picos presentes sabidos. Esto puede ayudar a determinar qué moléculas están presentes, o cuántas átomos están presentes en la molécula.

Fuentes

  1. http://www.ecs.umass.edu/eve/background/methods/chemical/Openlit/Chromacademy%20LCMS%20Intro.pdf
  2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16026613
  3. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2643089/
  4. http://www.rsc.org/images/AMC%20LCMS%20Guide_tcm18-240030.pdf

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Last Updated: Sep 19, 2018

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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