O híbrido Captação-Baseou a detecção humana do Papillomavirus contra o PCR

Os tipos de alto risco de vírus de papiloma humano (HPV) são um do factor de risco o mais importante para carcinomas cervicais nas mulheres. Convencionalmente, a citologia do exame preventivo e o PCR foram usados para seleccionar para a presença de HPV. Recentemente, um teste novo do anúncio publicitário HPV foi propor para o diagnóstico do ensaio da captação do HPV-Híbrido.

Fundo com vírus. Papillomavirus humano na superfície de uma pilha. Um modelo é usado dados da estrutura macromolecular viral do banco de dados de proteína (PDB 3J6R). Crédito de imagem: Kateryna Kon/Shutterstock
Fundo com vírus. Papillomavirus humano na superfície de uma pilha. Um modelo é construído usando dados da estrutura macromolecular viral do banco de dados de proteína (PDB 3J6R). Crédito de imagem: Kateryna Kon/Shutterstock

Princípio de detecção híbrida (HC) da captação HPV

Este ensaio usa um ensaio da hibridação do ácido nucleico onde as amostras com o ADN do alvo cruzem com uma ponta de prova do RNA de HPV. Os híbrido de RNA-DNA são capturados então usando um microplate que seja revestido com os anticorpos para híbrido de DNA-RNA. Estes são detectados então usar a quimioluminescência. Os anticorpos conjugaram com fosfato alcalino e o específico para híbrido de DNA-RNA reage com os híbrido que são detectados então subseqüentemente usar uma carcaça quimiluminescente. A amplificação do sinal ocorre enquanto diversos anticorpos conjugados ligam a cada híbrido. O fosfato alcalino fende a carcaça quimiluminescente, conduzindo à emissão da luz que é capturada usando um luminometer. Se o ADN do alvo esta presente, pode ser detectado usar a presença de luz.

Medindo o nível de seqüências de alto risco

Lá dois tipos de HPV: risco elevado e de baixo-risco. Os tipos de alto risco incluem: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 e 68, quando os tipos de baixo-risco incluírem: 6, 11, 42, 43 e 44. A luz do luminometer é medida como unidades claras relativas (RLU). Quando o RLU é maior do que o valor da interrupção, a presença de tipos de alto risco é alta; considerando que, um baixo valor de RLU indicou a baixa presença de seqüências de alto risco.

Sensibilidade e especificidade do PCR contra HC

A sensibilidade de um teste é sua capacidade para detectar correctamente uma amostra (ou a taxa positiva verdadeira), quando a especificidade for a capacidade de um teste para identificar correctamente uma amostra negativa (ou a taxa negativa verdadeira). As sensibilidades e as especificidades do método do PCR e do HC foram determinadas em casos diferentes. No caso das lesões intraepithelial de primeira qualidade, a sensibilidade do ensaio de HC e o PCR eram 85,2 e 74,0%. Em um outro estudo de neoplasma intraepithelial cervicais, a especificidade era 83,5% para o PCR e 85,4% para HC. A especificidade de ambos os testes era 80% neste estudo.

Taxa com carácter de previsão positiva e negativa de PCR contra HC

O valor com carácter de previsão positivo é a probabilidade que os assuntos que testaram o positivo em um teste são certamente positivos para uma circunstância, quando o valor com carácter de previsão negativo for a probabilidade que uma amostra que teste o negativo seja certamente negativo para uma circunstância. Em um estudo de lesões cervicais, os valores com carácter de previsão positivos e negativos do PCR eram 27% e 97%, quando os valores com carácter de previsão positivos e negativos de HC eram 50% e 97%. Contudo, os estudos diferentes relatam resultados variáveis. Em um outro estudo, os valores com carácter de previsão positivos de HC e o PCR para detectar lesões intraepithelial eram 4,5% e 3,6%. Os valores com carácter de previsão negativos de HC e de PCR foram relatados para ser 99,6% e 99,5%.

Agreeability do Inter-Teste (valor do Kappa de Cohen)

Os estudos igualmente tentaram medir a taxa de agreeability entre métodos do PCR e do HC. Isto é feito usando uma estatística chamada valor do kappa de Cohen. Esta estatística mede o inter-acordo entre dois parâmetros que medem a mesma coisa. Os estudos diferentes mostram um valor do kappa de ao redor 0,7, que mostra um acordo substancial entre o PCR e o HC.

Vantagens do ensaio de HC sobre o PCR

Embora ambos os testes tenham níveis similares de valor com carácter de previsão negativo, a sensibilidade e a especificidade são mais altas para o ensaio de HC comparado ao PCR. Também, as etapas no ensaio de HC facilmente são controladas e podem ser executadas por um técnico. Contudo, as etapas no PCR exigiram diversas etapas que precisam de ser aperfeiçoadas em cada etapa.

Desvantagens do ensaio de HC sobre o PCR

O teste do risco elevado HPV de HC deve ser executado nas amostras que foram recolhidas usando o dispositivo da coleção do ADN de HC.  Também, as amostras devem imediatamente ser colocadas no media do transporte do espécime e ser armazenadas em -20°. Este dispositivo da coleção não deve ser usado para recolher amostras das mulheres gravidas. Determinados factores, tais como a presença de creme antifungoso, geléia contraceptiva, lavagem podem conduzir aos resultados do negativo falso.
Baseado em todos estes factores, os laboratórios individuais devem decidir que o protocolo e o ensaio a ser seguidos basearam nas exigências específicas.

Fontes

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Last Updated: Sep 19, 2018

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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