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Ventajas hidrofílicas de la cromatografía de la acción recíproca

La cromatografía hidrofílica de la acción recíproca es una variación de la cromatografía de fase líquida que recubre en la función con cromatografía del ión y la cromatografía líquida inversa. Este método ofrece varias ventajas al realizar el análisis de solutos polares o básicos.

La cromatografía hidrofílica de la acción recíproca es una variación de la cromatografía de fase líquidaarleksey | Shutterstock

¿Cuál es cromatografía hidrofílica de la acción recíproca?

HILIC utiliza una fase estacionaria polar, tal como sílice o fase bajo fianza polar, y la fase movible consiste en el agua de 5 - del 40% que se combina con un disolvente menos polar, tal como acetonitrilo. Las fases estacionarias del sílice polar o aún no polar se han utilizado conjuntamente con disolvente altamente orgánico.

Las fases de la cromatografía hidrofílica de la acción recíproca se pueden agrupar en cinco clases: el sílice unbonded simple, fase bajo fianza amino, amida pegó fase, fase bajo fianza catiónica, y la fase bajo fianza zwitterionic.

Aunque la opción usual para la fase movible sea acetonitrilo, cualquier disolvente aprótico que sea miscible con agua se puede utilizar con este fin. En caso de que se utilice el alcohol, la concentración debe ser más alta tales que pueden tener un grado similar de retención como combinación del disolvente y del agua apróticos.

Los añadidos en algunos casos iónicos, incluyendo amonio acetato y el formato del amonio, se pueden utilizar para controlar las dos fases. Semejantemente, las sales pueden aumentar la polaridad de la fase movible y afectar al proceso de la elución.

Ventajas de la cromatografía hidrofílica de la acción recíproca

Sensibilidad creciente de la detección

Este método puede aumentar la sensibilidad de la detección de la espectrometría de masa. La cromatografía hidrofílica de la acción recíproca tiene alto contenido orgánico, haciéndolo eficiente para pintar (con vaporizador) y el desolvation durante la espectrometría de masa electrospray. En un estudio, la sensibilidad se podía aumentar en tres órdenes de magnitud comparados a la cromatografía líquida inversa mientras que realizaba el análisis del salbutamol del broncodilatador.

Flujos más altos

Pues la viscosidad de la fase movible es inferior, el flujo puede ser más alto en este método en comparación con la cromatografía líquida inversa. En el caso de CLAR de la reverso-fase, la viscosidad del acetonitrilo es 0.9-0.86 centipoise (cP).

Ésta es dos veces la viscosidad del acetonitrilo usada en cromatografía hidrofílica de la acción recíproca, donde está alrededor 0,4 centipoise. La ventaja de flujos más altos es mayor eficiencia comparada a la CLAR de la reverso-fase. También, la difusibilidad del soluto es más alta en la fase movible de esta técnica.

Una eficacia más alta

El uso de las fases movibles que tienen viscosidad inferior también permite el uso de las olumnas que están dos veces mientras las que está usadas en CLAR reversa de la fase. Los estudios muestran que la contrapresión inferior usando fases superficial porosas del sílice con una talla de pequeña partícula puede lograr eficacia muy alta. Esto se puede combinar con la viscosidad más inferior de la fase movible en cromatografía hidrofílica de la acción recíproca para lograr una eficacia en conjunto más alta.

Velocidades más rápidas de la separación

La viscosidad del eluyente también lleva para ayunar extremadamente separación de la muestra, que se asocia a más de baja impedancia durante la separación. En un estudio, tres olumnas porosas del sílice (15 cm de largo) fueron acopladas superficial en serie, y separación fueron logradas hacia adentro alrededor 15 minutos, demostrando la velocidad más alta de este método.

En otro estudio, fue mostrado que el etileno puenteado las olumnas híbridas (BEH) podría lograr una separación más eficiente que produjo picos más afilados. Esto puede aumentar la sensibilidad del método.

Capacidad de cargamento para los solutos básicos

La capacidad de cargamento para los solutos básicos es más alta comparada a la CLAR reversa de la fase. Sin embargo, pues el disolvente consiste en sobre todo el acetonitrilo, puede haber entregas con respecto a la solubilidad de ciertos analitos.

Fuentes

Further Reading

Last Updated: Apr 15, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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