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Aplicações hidrófilas da cromatografia da interacção

A cromatografia hidrófila da interacção (HILIC) é uma técnica da cromatografia líquida que seja usada para separar o moderado aos compostos altamente hidrófilos e polares baseados em sua retenção em uma fase estacionária hidrófila contra a fase móvel orgânica polar aquosa hidrófila.

Tubos de ensaio para a cromatografiaRopisme | Shutterstock

Princípios de HILIC

Os compostos iónicos e ionizable confiam tipicamente na separação pela cromatografia da troca iónica (IC) ou no íon que emparelha a cromatografia da inverter-fase (IP-RPLC).

Na cromatografia líquida da Reverso-fase tradicional (RPLC), os compostos polares, hidrófilos e cobrados são retidos preferencial na coluna. Isto é em contraste com o mecanismo da retenção em HILIC, que confia na divisão de um composto entre a camada de superfície aquosa da fase estacionária hidrófila e o compartimento orgânico, hidrófilo da fase móvel.

Secundário força, como o dipolo-dipolo, electrostático, e as interacções da ligação do hidrogênio influenciam esta separação, tendo por resultado a retenção do composto na fase estacionária ou na eluição na fase móvel.

Uma compreensão completa do mecanismo que é a base de HILIC e da base da selectividade e da retenção deve ser compreendida ainda. A melhoria na selecção de uma fase estacionária baseada na composição é uma área que está sendo desenvolvida.

Compreender as características dos compostos que estão sendo separados e de sua compatibilidade com várias fases estacionárias aperfeiçoará mais a separação.

HILIC como uma técnica complementar

HILIC é uma técnica complementar e pode ser usado conjuntamente com outras técnicas para aumentar a eficiência da separação.

Uma distinção característica de HILIC é que os componentes de uma mistura eluted no pedido do mais hidrófilo ao o mais menos hidrófilo. Isto contrasta com o pedido visto na cromatografia padrão da reverso-fase, onde a eluição ocorre no pedido de menos ao mais hidrófilo. Como tal, HILIC retem eficazmente os compostos hidrófilos que são retidos deficientemente na inverter-fase LC.

HILIC é altamente compatível com espectrometria em massa (MS), particularmente com relações electrospray (ESI) da ionização que precedem a Senhora. O componente polar alto do solvente orgânico da fase móvel de HILIC aumenta a eficiência da ionização no processo de ESI.

A ionização fornece a base de ESI, que confia em cobrar o composto do interesse na fase e na análise de gás pela espectrometria em massa. HILIC-MS pode, conseqüentemente, fornecer uma análise altamente sensível, quantitativa de uma vasta gama de soluções complexas que contêm compostos polares.

As aplicações de HILIC são particularmente centrais no produto químico e nos campos bioquímicos da pesquisa onde os compostos polares com uma massa molecular do baixo-à-media são os assuntos da análise. Estes incluem peptides, hidratos de carbono, antibióticos, drogas, ácidos aminados, nucleotides, nucleosides, e insecticidas.

HILIC-MS é uma ferramenta analítica complementar a RPLC-MS que fornece uma separação mais deficiente de componentes hidrófilos. HILIC-MS, contudo, permite que estes componentes hidrófilos sejam separados e detectados subseqüentemente na alta resolução. Combinar as duas técnicas aumenta assim capacidades analíticas para os compostos hidrófilos que são retidos deficientemente em RPLC.

HILIC é esperado avançar ràpida, particularmente no campos da química e da física de partículas da coluna.

Aplicações de HILIC na biomedicina

HILIC tem uma vasta gama de aplicações biomedicáveis, incluindo:

  • Engenharia química;
  • Bioquímica - para separar os peptides polares que seguem a digestão das proteínas para determinar a função e a estabilidade da proteína;
  • Farmacologia - para analisar drogas polares e os metabolitos, incluindo proteínas, peptides e anticorpos;
  • Agrícola - para analisar componentes polares do extracto da planta, tais como aqueles em ácidos fenólicos, em hidratos de carbono, em peptides, e em flavonóides;
  • Indústria alimentar - para detectar contaminadores do alimento, biotoxina marinhas, compostos polares pequenos e aminas biogénicas (este produzido por organismos).

Fontes

Further Reading

Last Updated: Feb 26, 2019

Hidaya Aliouche

Written by

Hidaya Aliouche

Hidaya is a science communications enthusiast who has recently graduated and is embarking on a career in the science and medical copywriting. She has a B.Sc. in Biochemistry from The University of Manchester. She is passionate about writing and is particularly interested in microbiology, immunology, and biochemistry.

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