Avertissement : Cette page est une traduction automatique de cette page à l'origine en anglais. Veuillez noter puisque les traductions sont générées par des machines, pas tous les traduction sera parfaite. Ce site Web et ses pages Web sont destinés à être lus en anglais. Toute traduction de ce site et de ses pages Web peut être imprécis et inexacte, en tout ou en partie. Cette traduction est fournie dans une pratique.

Chromatographie hydrophobe d'interaction (HIC)

La chromatographie hydrophobe d'interaction (HIC) est une technique puissante utilisée pour la purification des protéines dans des applications analytiques et préparatoires.

HIC sépare et épure des molécules de protéine sur la base de leur hydrophobicity - il est plus populaire que d'autres techniques de chromatographie pour la séparation des protéines car il utilise moins d'environnement de dénaturisation comparé à elles. Par conséquent l'activité biologique des protéines est maintenue intacte.

HIC peut également être effectivement employé pour retirer des impuretés ou la substance totale de produit dans les solutions aqueuses pendant qu'il exploite la différence dans les propriétés hydrophobes des ensembles et des molécules-cible.  Il est employé souvent en combination avec des techniques telles que la chromatographie d'échange ionique ou de filtration sur gel.

Le principe de la chromatographie hydrophobe d'interaction

Dans HIC, les molécules de protéine témoin sont introduites en fléau contenant un tampon de haut-sel. Le sel introduit l'interaction entre les régions hydrophiles et hydrophobes de la protéine et le support en réduisant la solvatisation des molécules témoin et en exposant leurs régions hydrophobes.  

La quantité de sel requise pour s'introduire gripper est inversement proportionnelle au hydrophobicity des molécules. Par conséquent les molécules témoin peuvent être éluées à l'extérieur dans la commande du hydrophobicity croissant utilisant un gradient décroissant de sel. Des molécules de protéine attachées peuvent être effectivement désorbées par le lavage avec de l'eau un tampon ou dilué.

Les opérations en chromatographie hydrophobe d'interaction

  • Des medias de HIC se composent de ligands alkyliques ou aryliques accouplés à une modification inerte et poreuse qui sont alors bourrés en fléau de chromatographie comme agencement de bâti bourré.
  • Un tampon modérément élevé de sel est employé pour remplir pores et espace entre les particules dans la modification. Les sels particuliers utilisés sont sulfate d'ammonium de 1-2M ou chlorure de sodium de 3M qui sont sélectés pour introduire l'interaction principale entre l'échantillon de protéine et le support tout en réduisant à un minimum que d'autres protéines moins hydrophobes (impuretés).
  • Le fléau est lavé pour enlever les protéines liées par non.
  • La concentration en sel est graduellement abaissée pour commencer à éluer des protéines. La manipulation des gradients de sel permet l'élution différentielle des protéines - des protéines ayant le hydrophobicity le plus inférieur sont éluées d'abord.
  • Un lavage final utilisant des aides sans sel de tampon enlèvent les protéines serrées serré. Les additifs dans le tampon peuvent davantage introduire la désorption des protéines attachées. Les additifs peuvent comprendre les alcools miscibles à l'eau, (` de ` saler-dans'') solutions de sel chaotropic et détergents.
  • Rarement, des conditions plus brutales telles que l'hydroxyde de sodium de 0.5-1.0M, l'éthanol de 70%, ou l'isopropanol de 30% sont exigés pour enlever toutes les protéines attachées.

Facteurs essentiels qui affectent des interactions hydrophobes

Ligand - le type de ligand utilisé détermine le comportement d'adsorption du réseau droit de protéines par exemple les ligands qu'alkyliques est hydrophobe tandis que les ligands aryliques montrent des interactions aromatiques et hydrophobes.

Modification - les hydrates de carbone hydrophiles tels que l'agarose réticulée et les matériaux synthétiques de copolymère sont les supports les plus utilisés généralement. Les différents supports varieront dans leur sélectivité même avec le même ligand.

Degré de remplacement - la capacité de liaison d'une protéine est directement proportionnelle au degré de remplacement du ligand. Cependant, les hauts niveaux du remplacement de ligand augmentent la force de l'interaction et la rendent difficile d'éluer les protéines.

La température - il y a une corrélation directe et positive entre tempéré et l'affinité des interactions hydrophobes. La température élevée influence également la structure et la solubilité des protéines. La température est rarement employée pour moduler l'élution des molécules dans HIC.

pH - Les phases mobiles utilisées dans HIC ont en grande partie une gamme neutre de pH de 5 - 7. L'effet du pH sur des interactions de protéine-support varie de la protéine à la protéine. Généralement, l'interaction hydrophobe entre les medias et la protéine diminue avec l'augmentation du pH pendant que la charge de protéine tend à augmenter. Tandis que le pH peut exercer un effet sur le degré de grippement de protéine, on ne le considère pas comme assez significatif employer des gradients de pH pour l'élution des molécules de corps dissous.

Concentration en sel - salez l'ajout au tampon et l'échantillon introduit la ligand-protéine grippant mais il y a un risque de précipitation de protéine aux concentrations élevées en sel. Du sodium, l'ammonium, ou les sulfates de potassium sont connus pour produire des effets plus élevés de précipitation bien qu'ils soient très efficaces en introduisant l'interaction entre le ligand et la protéine.

Références

Further Reading

Last Updated: Apr 12, 2019

Susha Cheriyedath

Written by

Susha Cheriyedath

Susha has a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Chemistry and Master of Science (M.Sc) degree in Biochemistry from the University of Calicut, India. She always had a keen interest in medical and health science. As part of her masters degree, she specialized in Biochemistry, with an emphasis on Microbiology, Physiology, Biotechnology, and Nutrition. In her spare time, she loves to cook up a storm in the kitchen with her super-messy baking experiments.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Cheriyedath, Susha. (2019, April 12). Chromatographie hydrophobe d'interaction (HIC). News-Medical. Retrieved on April 17, 2021 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx.

  • MLA

    Cheriyedath, Susha. "Chromatographie hydrophobe d'interaction (HIC)". News-Medical. 17 April 2021. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx>.

  • Chicago

    Cheriyedath, Susha. "Chromatographie hydrophobe d'interaction (HIC)". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx. (accessed April 17, 2021).

  • Harvard

    Cheriyedath, Susha. 2019. Chromatographie hydrophobe d'interaction (HIC). News-Medical, viewed 17 April 2021, https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News Medical.