Aviso: Esta página é uma tradução automática da página original em inglês. Por favor note uma vez que as traduções são geradas por máquinas, não tradução tudo será perfeita. Este site e suas páginas da Web destinam-se a ler em inglês. Qualquer tradução deste site e suas páginas da Web pode ser imprecisas e imprecisos no todo ou em parte. Esta tradução é fornecida como uma conveniência.

Cromatografia hidrofóbica da interacção (HIC)

A cromatografia hidrofóbica da interacção (HIC) é uma técnica poderosa usada para a purificação das proteínas em aplicações analíticas e preparatórias.

HIC separa e refina moléculas de proteína com base em seu hydrophobicity - é mais popular do que outras técnicas da cromatografia para a separação de proteínas porque emprega um ambiente menos de desnaturalização comparado a elas. Conseqüentemente a actividade biológica das proteínas é mantida intacto.

HIC pode igualmente eficazmente ser usado para remover as impurezas ou a espécie agregada do produto em soluções aquosas enquanto explora a diferença em propriedades hidrofóbicas dos agregados e das moléculas do alvo.  É usado frequentemente em combinação com técnicas tais como a cromatografia da filtragem da troca iónica ou de gel.

O princípio de cromatografia hidrofóbica da interacção

Em HIC, as moléculas de proteína da amostra são introduzidas na coluna que contem um amortecedor de alto-sal. O sal promove a interacção entre as regiões hidrófilas e hidrofóbicas da proteína e o media reduzindo o solvation de moléculas da amostra e expor suas regiões hidrofóbicas.  

A quantidade de sal necessário para promover ligar é inversamente proporcional ao hydrophobicity das moléculas. Daqui as moléculas da amostra podem ser eluted para fora no pedido do hydrophobicity crescente usando um inclinação de diminuição de sal. As moléculas de proteína encadernadas podem eficazmente ser desorbed lavando com um amortecedor ou água diluída.

As etapas na cromatografia hidrofóbica da interacção

  • Os media de HIC são compor das ligantes do alkyl ou do arilo acopladas a uma matriz inerte, porosa que são embaladas então em uma coluna de cromatografia como um regime da base embalada.
  • Um amortecedor moderada alto de sal é usado para encher os poros e o espaço entre partículas na matriz. Os sais típicos usados são cloreto do sulfato do amónio de 1-2M ou de sódio de 3M que são seleccionados para promover a interacção chave entre a amostra da proteína e o media enquanto minimizando que de outras proteínas menos hidrofóbicas (impurezas).
  • A coluna é lavada para remover as proteínas do não-limite.
  • A concentração de sal é abaixada gradualmente para começar eluting proteínas. A manipulação de inclinações de sal permite a eluição diferencial das proteínas - as proteínas que têm o mais baixo hydrophobicity eluted primeiramente.
  • Uma lavagem final que usa ajudas sem sal do amortecedor remove as proteínas do apertado-limite. Os aditivos no amortecedor podem mais promover a dessorção das proteínas encadernadas. Os aditivos podem incluir álcoois água-miscible, (` do ` salgar-em'') soluções de sal chaotropic e detergentes.
  • Raramente, umas condições mais ásperas tais como o hidróxido de sódio de 0.5-1.0M, o álcool etílico de 70%, ou o isopropanol de 30% são exigidos para remover todas as proteínas encadernadas.

Factores cruciais que afectam interacções hidrofóbicas

Ligante - o tipo de ligante usado determina o comportamento da adsorção das proteínas por exemplo que as ligantes do alkyl da corrente recta são hidrofóbicas quando as ligantes arílicas mostrarem interacções aromáticas e hidrofóbicas.

Matriz - os hidratos de carbono hidrófilos tais como o agarose ligado e os materiais sintéticos do copolímero são os apoios os mais de uso geral. Os apoios diferentes variarão em sua selectividade mesmo com a mesma ligante.

Grau de substituição - a capacidade de ligação de uma proteína é directamente proporcional ao grau de substituição da ligante. Contudo, os níveis elevados de substituição da ligante aumentam a força da interacção e fazem-na difícil elute as proteínas.

Temperatura - há uma correlação directa e positiva entre temperado e a afinidade de interacções hidrofóbicas. A alta temperatura igualmente influencia a estrutura e a solubilidade das proteínas. A temperatura é usada raramente para modular a eluição das moléculas em HIC.

pH - as fases móveis usadas em HIC tenha na maior parte uma escala neutra do pH de 5 - 7. O efeito do pH em interacções do proteína-media varia da proteína à proteína. Geralmente, a interacção hidrofóbica entre media e a proteína diminuem com aumento no pH enquanto a carga da proteína tende a aumentar. Enquanto o pH pode ter um efeito no grau de emperramento da proteína, não se considera significativo bastante usar inclinações do pH para a eluição de moléculas do solute.

Concentração de sal - salgue a adição ao amortecedor e a amostra promove a ligante-proteína que liga mas há um risco de precipitação da proteína em concentrações altas de sal. O sódio, o amónio, ou os sulfatos do potássio são sabidos para produzir uns efeitos mais altos da precipitação embora é muito eficaz em promover a interacção entre a ligante e a proteína.

Referências

Further Reading

Last Updated: Apr 12, 2019

Susha Cheriyedath

Written by

Susha Cheriyedath

Susha has a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Chemistry and Master of Science (M.Sc) degree in Biochemistry from the University of Calicut, India. She always had a keen interest in medical and health science. As part of her masters degree, she specialized in Biochemistry, with an emphasis on Microbiology, Physiology, Biotechnology, and Nutrition. In her spare time, she loves to cook up a storm in the kitchen with her super-messy baking experiments.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Cheriyedath, Susha. (2019, April 12). Cromatografia hidrofóbica da interacção (HIC). News-Medical. Retrieved on April 14, 2021 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx.

  • MLA

    Cheriyedath, Susha. "Cromatografia hidrofóbica da interacção (HIC)". News-Medical. 14 April 2021. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx>.

  • Chicago

    Cheriyedath, Susha. "Cromatografia hidrofóbica da interacção (HIC)". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx. (accessed April 14, 2021).

  • Harvard

    Cheriyedath, Susha. 2019. Cromatografia hidrofóbica da interacção (HIC). News-Medical, viewed 14 April 2021, https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News Medical.