Advertencia: Esta página es una traducción de esta página originalmente en inglés. Tenga en cuenta ya que las traducciones son generadas por máquinas, no que todos traducción será perfecto. Este sitio Web y sus páginas están destinadas a leerse en inglés. Cualquier traducción de este sitio Web y su páginas Web puede ser imprecisa e inexacta en su totalidad o en parte. Esta traducción se proporciona como una conveniencia.

Cromatografía hidrofóbica de la acción recíproca (HIC)

La cromatografía hidrofóbica de la acción recíproca (HIC) es una técnica potente usada para la purificación de proteínas en usos analíticos y preparatorios.

HIC separa y purifica las moléculas de proteína en base de su hydrophobicity - es más popular que otras técnicas de la cromatografía para la separación de proteínas pues emplea un ambiente menos de desnaturalización comparado a ellas. Por lo tanto la actividad biológica de las proteínas se mantiene intacta.

HIC se puede también utilizar eficazmente para quitar impurezas o especie global del producto en soluciones acuosas mientras que explota la diferencia en las propiedades hidrofóbicas de los agregados y de las moléculas del objetivo.  Es de uso frecuente conjuntamente con técnicas tales como cromatografía de la filtración del intercambio de iones o de gel.

El principio de la cromatografía hidrofóbica de la acción recíproca

En HIC, las moléculas de proteína de la muestra se introducen en la olumna que contiene un almacenador intermedio de la alto-sal. La sal asciende la acción recíproca entre las regiones hidrofílicas e hidrofóbicas de la proteína y el ambiente reduciendo la disolución de las moléculas de la muestra y exponiendo sus regiones hidrofóbicas.  

La cantidad de sal necesaria para ascender el atar es inverso proporcional al hydrophobicity de las moléculas. Por lo tanto las moléculas de la muestra se pueden enjuagar fuera en la orden del hydrophobicity cada vez mayor usando un gradiente de disminución de la sal. Las moléculas de proteína encuadernadas pueden ser deabsorbidas efectivo lavándose con un almacenador intermedio o un agua diluído.

Los pasos en cromatografía hidrofóbica de la acción recíproca

  • Los ambientes de HIC se componen de los ligands alkílicos o ariles acoplados a una matriz inerte, porosa que entonces se cargan en una olumna de cromatografía como ordenación de la base cargada.
  • Un almacenador intermedio moderado alto de la sal se utiliza para llenar los poros y el espacio entre las partículas en la matriz. Las sales típicas usadas son cloruro del sulfato del amonio del 1-2M o de sodio de 3M que se seleccionan para ascender la acción recíproca dominante entre la muestra de la proteína y el ambiente mientras que disminuyen que de otras proteínas menos hidrofóbicas (impurezas).
  • La olumna se lava para quitar las proteínas del no-salto.
  • La concentración de la sal se baja gradualmente para comenzar a enjuagar las proteínas. La manipulación de los gradientes de la sal permite la elución diferenciada de las proteínas - las proteínas que tienen el hydrophobicity más inferior se enjuagan primero.
  • Una estela turbulenta final usando ayudas sin sal del almacenador intermedio quita las proteínas del apretado-salto. Los añadidos en el almacenador intermedio pueden ascender más lejos la desorción de las proteínas encuadernadas. Los añadidos pueden incluir los alcoholes miscibles en agua, (` del ` salar-en'') soluciones de sal chaotropic y los detersorios.
  • Raramente, condiciones más duras tales como hidróxido de sodio de los 0.5-1.0M, el etanol del 70%, o el isopropanol del 30% se requieren para quitar todas las proteínas encuadernadas.

Factores cruciales que afectan a acciones recíprocas hidrofóbicas

Ligand - el tipo de ligand usado determina el comportamiento de la adsorción de la cadena derecha de las proteínas e.g que los ligands alkílicos son hidrofóbicos mientras que los ligands ariles muestran acciones recíprocas aromáticas e hidrofóbicas.

Matriz - los hidratos de carbono hidrofílicos tales como agarosa reticulada y los materiales sintetizados del copolímero son los apoyos más de uso general. Diversos apoyos variarán en su selectividad incluso con el mismo ligand.

Grado de substitución - la capacidad de enlace de una proteína es directamente proporcional al grado de substitución del ligand. Sin embargo, los niveles de la substitución del ligand aumentan la fuerza de la acción recíproca y la hacen difícil enjuagar las proteínas.

Temperatura - hay una correlación directa y positiva entre templado y la afinidad de acciones recíprocas hidrofóbicas. La temperatura alta también influencia la estructura y la solubilidad de proteínas. La temperatura se utiliza raramente para modular la elución de moléculas en HIC.

pH - Las fases movibles usadas en HIC tienen sobre todo un alcance neutral del pH de 5 - 7. El efecto del pH sobre acciones recíprocas del proteína-ambiente varía de la proteína a la proteína. Generalmente, la acción recíproca hidrofóbica entre los ambientes y la proteína disminuye con aumento en el pH mientras que la carga de la proteína tiende a aumentar. Mientras que el pH puede tener un efecto sobre el grado de atascamiento de la proteína, no se considera bastante importante utilizar los gradientes del pH para la elución de las moléculas del soluto.

Concentración de la sal - sale la adición al almacenador intermedio y la muestra asciende la ligand-proteína que ata pero hay un riesgo de precipitación de la proteína en las altas concentraciones de la sal. El sodio, el amonio, o los sulfatos del potasio se saben para producir efectos más altos de la precipitación aunque son muy efectivos en ascender la acción recíproca entre el ligand y la proteína.

Referencias

Further Reading

Last Updated: Apr 12, 2019

Susha Cheriyedath

Written by

Susha Cheriyedath

Susha has a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Chemistry and Master of Science (M.Sc) degree in Biochemistry from the University of Calicut, India. She always had a keen interest in medical and health science. As part of her masters degree, she specialized in Biochemistry, with an emphasis on Microbiology, Physiology, Biotechnology, and Nutrition. In her spare time, she loves to cook up a storm in the kitchen with her super-messy baking experiments.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Cheriyedath, Susha. (2019, April 12). Cromatografía hidrofóbica de la acción recíproca (HIC). News-Medical. Retrieved on June 18, 2021 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx.

  • MLA

    Cheriyedath, Susha. "Cromatografía hidrofóbica de la acción recíproca (HIC)". News-Medical. 18 June 2021. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx>.

  • Chicago

    Cheriyedath, Susha. "Cromatografía hidrofóbica de la acción recíproca (HIC)". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx. (accessed June 18, 2021).

  • Harvard

    Cheriyedath, Susha. 2019. Cromatografía hidrofóbica de la acción recíproca (HIC). News-Medical, viewed 18 June 2021, https://www.news-medical.net/life-sciences/Hydrophobic-Interaction-Chromatography-(HIC).aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News Medical.