L'immunohistochimie (IHC) est une technique d'imagerie de concevoir des antigènes en cellules. Les anticorps marqués grippent pour viser des antigènes dans la cellule à l'image la distribution et la localisation des protéines spécifiques d'intérêt.
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Les origines de l'immunohistochimie (IHC)
La première étude utilisant l'IHC était publiée pendant les années 1940 où des antigènes du streptocoque bactérien pneumonie de substance ont été découverts dans les tissus. Depuis lors, une quantité de développements et plusieurs différentes approches ont été effectués. Aujourd'hui, l'IHC représente une procédure courante assez normale, mais l'essentiel dans beaucoup de réglages.
L'IHC conventionnel concerne souiller les parties minces de tissu immunologiquement ; cependant, les techniques récentes peuvent automatiser la préparation des échantillons et la souillure. Les approches traditionnelles ont employé une souillure ou couleur pour un objectif, mais les développements récents ont promu l'inducteur de l'IHC en couleurs.
Méthodologie fondamentale
Il y a généralement quatre opérations qui précèdent la représentation de l'échantillon : préparation, recherche d'antigène, blocage de mouvement propre, et dépistage d'objectif. Puisque l'objectif de l'IHC est de localiser des éléments cellulaires, l'architecture de tissu et la morphologie de cellules doit être préservée.
En tous cas, du sang doit être enlevé pour enlever n'importe quelle interférence par des antigènes de sang avec la détection de l'antigène d'objectif, alors que les tissus sont fixes, couramment en formaline et puis être inclus dans le solide de paraffine. La fixation et la méthode de encastrer est la FFPE type visée. Encastrer permet au tissu d'être sectionné et monté.
Avant recherche d'antigène, la paraffine de la FFPE doit être enlevée pour permettre aux anticorps de réagir avec de l'antigène. La recherche d'antigène elle-même est faite pour assurer démasquer les antigènes qui ont développé des ponts en méthylène entre les protéines de la méthode de la FFPE. Ceci est type fait en chauffant les parties ou en assimilant des parties de tissu.
Quelques molécules de manière endogène de occurrence doivent être bloquées dans l'IHC pour les empêcher de donner des résultats faussement positifs. Le blocage de mouvement propre concerne matériel ou chimiquement bloquant la biotine ou l'activité enzymatique. Cependant, la souillure de mouvement propre peut également être provoquée par la liaison non spécifique de l'anticorps. Des sites potentiels sont pour cette raison bloqués avant l'application d'anticorps.
Cellules de visualisation après IHC
Il y a deux méthodes principales de réaliser le signal visuel dans l'IHC, appelées la méthode directe et indirecte. Les deux dirigez et les méthodes indirectes utilisent des anticorps pour trouver l'antigène d'objectif, mais le choix peut différer selon l'abondance d'antigène et la lecture désirée.
La méthode directe a la borne, c.-à-d. la fluorescence ou autre, marqué sur l'anticorps qui grippe l'antigène. Avec la méthode indirecte, un anticorps secondaire est marqué, et celui-ci secondaire réagit avec de l'anticorps primaire, qui grippe consécutivement l'antigène. Tandis que la méthode directe épargne le temps, le signe indirect de la méthode est amplifié, la rendant beaucoup plus efficace.
Les échantillons souillés peuvent être imagés en utilisant la lumière ou la microscopie à fluorescence. La microscopie confocale peut être appliquée à certaines méthodes de dépistage d'anticorps, et fournira un petit groupe plus grand. En cas de grands ensembles de données, l'analyse d'examen critique satisfaite élevée peut être employée pour mesurer rapidement des niveaux des éléments cellulaires et pour comparer des caractéristiques de plusieurs échantillons.
Quelles sont les applications de l'IHC ?
L'IHC est employé en éventail entier des sciences biologiques : recherche, diagnostic, et développement biologiques de médicament. Dans la recherche biologique, l'IHC peut concevoir l'organisme de tissu, le développement d'organe, et l'apoptose, pour nommer juste quelques inducteurs.
L'IHC est également la méthode préférée pour étudier l'expression de l'ADN mitochondrial et nucléaire de matériel génétique, dans des mitochondries dans de petits prélèvements de tissu. Ceci est fait par les anticorps qui visent l'ADN ou qui visent les sous-unités des composés de chaîne respiratoire codés par ADN mitochondrial et nucléaire.
Dans les cadres médicaux, l'IHC peut être employé diagnostique pour viser les bornes spécifiques des maladies et des conditions. Par exemple, des marqueurs tumoraux peuvent être visés par IHC pour le diagnostiquer comme bénin ou malin, déterminez l'étape de la tumeur, et pour recenser le type de cellules.
En conclusion, dans le développement de médicament, l'IHC est employé pour vérifier l'efficacité d'un médicament. Ceci peut être fait par dépistage d'activité, ou en visant en haut ou en bas le règlement des bornes de la maladie d'objectif dans le tissu. Il peut également être employé pour prévoir des réponses au traitement en traitant différentes malignités.