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Tecniche (IHC) di rappresentazione del Immunohistochemistry

Il Immunohistochemistry (IHC) è una tecnica di rappresentazione per visualizzare gli antigeni in celle. Gli anticorpi contrassegnati legano per mirare agli antigeni nella cella all'immagine la distribuzione e la localizzazione delle proteine specifiche di interesse.

Celle di cancro al seno che sono state visualizzate facendo uso del immunohistochemistry - foto catturata da David Litman

David Litman | Shutterstock

Le origini del immunohistochemistry (IHC)

Il primo studio facendo uso di IHC è stato pubblicato negli anni 40 in cui gli antigeni dello streptococco batterico polmonite di specie sono stati scoperti nei tessuti. Da allora, una ricchezza degli sviluppi e vari approcci sono stati fatti. Oggi, IHC rappresenta una procedura sistematica equo standard, ma essenziale in molte impostazioni.

IHC convenzionale comprende macchiare le sezioni sottili del tessuto immunologicamente; tuttavia, le tecniche recenti possono automatizzare il preparato e la macchiatura del campione. Gli approcci tradizionali hanno usato un macchia o colore per un obiettivo, ma gli sviluppi recenti hanno avanzato il campo di IHC multicolore.

Metodologia di base

Ci sono generalmente quattro punti che precedono la rappresentazione del campione: preparato, recupero dell'antigene, didascalia di sfondo e rilevazione dell'obiettivo. Poiché lo scopo di IHC è di localizzare le componenti cellulari, l'architettura del tessuto e la morfologia delle cellule deve essere conservata.

Comunque, il sangue deve essere eliminato per eliminare comunemente tutta l'interferenza dagli antigeni di sangue con rilevazione dell'antigene dell'obiettivo, mentre i tessuti sono fissi, in formalina e poi essere incluso nella cera paraffinica. La fissazione ed il metodo di incassassatura è FFPE tipicamente riferita a. L'incassassatura permette che il tessuto sia sezionato e montato.

Prima di recupero dell'antigene, la paraffina dalla FFPE deve essere eliminata per permettere che gli anticorpi reagiscano con l'antigene. Il recupero stesso dell'antigene è fatto per assicurare gli antigeni di smascheramento che hanno sviluppato i ponti del metilene fra le proteine dal metodo di FFPE. Ciò è fatta tipicamente mediante il riscaldamento delle sezioni o la digestione delle sezioni del tessuto.

Alcune molecole in modo endogeno d'avvenimento devono essere bloccate in IHC per impedirli fornire risultati del falso positivo. La didascalia di sfondo comprende fisicamente o chimicamente bloccando l'attività dell'enzima o del biotina. Tuttavia, la macchiatura di sfondo può anche essere causata tramite il legame non specifico dell'anticorpo. I siti potenziali quindi sono bloccati prima dell'applicazione dell'anticorpo.

Celle di visualizzazione dopo IHC

Ci sono due metodi main di raggiungimento del segnale visivo in IHC, chiamati il metodo diretto ed indiretto. Entrambe diriga ed i metodi indiretti utilizzano gli anticorpi per individuare l'antigene dell'obiettivo, ma la scelta può differire secondo l'abbondanza dell'antigene e la lettura desiderata.

Il metodo diretto ha l'indicatore, cioè la fluorescenza o altra, contrassegnato sull'anticorpo che lega l'antigene. Con il metodo indiretto, un anticorpo secondario è quello contrassegnato e questo secondario reagisce con l'anticorpo primario, che a sua volta lega l'antigene. Mentre il metodo diretto salva il tempo, il segnale del metodo indiretto è ampliato, rendente lo molto più efficace.

I campioni macchiati possono essere imaged impiegando l'indicatore luminoso o la microscopia di fluorescenza. La microscopia confocale può applicarsi a determinati metodi di rilevazione dell'anticorpo e renderà il maggior dettaglio. In caso di grandi insiemi di dati, l'alta analisi di selezione contenta può essere usata per quantificare rapidamente i livelli di componenti cellulari e per confrontare i dati da parecchi campioni.

Che cosa sono le applicazioni di IHC?

IHC è utilizzato nell'intera gamma di scienze biologiche: ricerca, diagnosi e sviluppo biologici della droga. Nella ricerca biologica, IHC può prevedere l'organizzazione del tessuto, lo sviluppo dell'organo ed il apoptosis, per nominare appena alcuni campi.

IHC è egualmente il metodo preferito per lo studio dell'espressione del DNA mitocondriale che nucleare del materiale genetico, sia, in mitocondri nei piccoli campioni di tessuto. Ciò è fatta dagli anticorpi che mirano al DNA o che mirano agli sottounità dei complessi a catena respiratori codificati da DNA mitocondriale e nucleare.

Nelle impostazioni mediche, IHC può essere usato diagnostico per mirare agli indicatori specifici delle malattie e delle circostanze. Per esempio, i marcatori tumorali possono essere mirati a da IHC per diagnosticarlo come benigno o maligno, determini la fase del tumore ed identificare il tipo delle cellule.

Per concludere, nello sviluppo della droga, IHC è utilizzato per verificare l'efficacia di una droga. Ciò può essere fatta tramite rilevazione di attività, o mirando verso l'alto o verso il basso al regolamento degli indicatori della malattia dell'obiettivo nel tessuto. Può anche essere usata per predire le risposte del trattamento quando tratta le malignità differenti.

Sorgenti

Last Updated: Jan 3, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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