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Técnicas (IHC) de imagem lactente do Immunohistochemistry

O Immunohistochemistry (IHC) é uma técnica de imagem lactente para visualizar antígenos nas pilhas. Os anticorpos etiquetados ligam para visar antígenos na pilha à imagem a distribuição e a localização de proteínas específicas do interesse.

Pilhas de cancro da mama que foram visualizadas usando o immunohistochemistry - foto tomada por David Litman

David Litman | Shutterstock

As origens do immunohistochemistry (IHC)

O primeiro estudo que usa IHC foi publicado nos anos 40 em que os antígenos do estreptococo bacteriano pneumonia da espécie foram descobertos nos tecidos. Desde então, uma riqueza das revelações e diversas aproximações diferentes foram feitas. Hoje, IHC representa um procedimento rotineiro razoavelmente padrão, mas essencial em muitos ajustes.

IHC convencional envolve manchar secções finas do tecido imunològica; contudo, as técnicas recentes podem automatizar a preparação e a mancha da amostra. As aproximações tradicionais usaram uma mancha ou cor para um alvo, mas as revelações recentes promoveram o campo da multi-cor IHC.

Metodologia básica

Há geralmente quatro etapas que precedem a imagem lactente da amostra: preparação, recuperação do antígeno, obstrução do fundo, e detecção do alvo. Porque o objetivo de IHC é localizar componentes celulares, a arquitetura do tecido e a morfologia da pilha precisam de ser preservadas.

Em todo caso, o sangue deve ser removido para remover geralmente toda a interferência por antígenos do sangue com a detecção do antígeno do alvo, quando os tecidos forem fixos, na formalina e então ser encaixado na cera de parafina. A fixação e o método do encaixotamento são referidos tipicamente FFPE. O encaixotamento permite que o tecido seja seccionado e montado.

Antes da recuperação do antígeno, a parafina do FFPE precisa de ser removida para permitir que os anticorpos reajam com o antígeno. A recuperação própria do antígeno é feita para assegurar desmascarar os antígenos que desenvolveram pontes do metileno entre proteínas do método de FFPE. Isto é feito tipicamente aquecendo as secções ou digerindo secções do tecido.

Algumas moléculas endògena de ocorrência precisam de ser obstruídas em IHC para impedir que dê resultados de falso positivo. A obstrução do fundo envolve fisicamente ou quimicamente obstruindo a actividade da biotina ou de enzima. Contudo, a mancha do fundo pode igualmente ser causada pelo emperramento não específico do anticorpo. Os locais potenciais são obstruídos conseqüentemente antes da aplicação do anticorpo.

Pilhas visualizando após IHC

Há dois métodos principais de conseguir o sinal visual em IHC, chamados o método directo e indirecto. Ambo dirija e os métodos indirectos utilizam anticorpos para detectar o antígeno do alvo, mas a escolha pode diferir segundo a abundância do antígeno e o readout desejado.

O método directo tem o marcador, isto é a fluorescência ou outro, etiquetado no anticorpo que liga o antígeno. Com o método indirecto, um anticorpo secundário é etiquetado, e este secundário reage com o anticorpo preliminar, que liga por sua vez o antígeno. Quando o método directo ganhar o tempo, o sinal do método indirecto está amplificado, fazendo o muito mais eficaz.

As amostras manchadas podem ser imaged empregando a luz ou a microscopia de fluorescência. A microscopia Confocal pode ser aplicada a determinados métodos de detecção do anticorpo, e renderá o maior detalhe. No caso das grandes séries de dados, a análise de selecção satisfeita alta pode ser usada para determinar rapidamente níveis de componentes celulares e para comparar dados de diversas amostras.

Que são as aplicações de IHC?

IHC é usado no espectro inteiro de ciências biológicas: pesquisa, diagnóstico, e revelação biológicos da droga. Na pesquisa biológica, IHC pode visualizar a organização do tecido, a revelação do órgão, e o apoptosis, para nomear apenas alguns campos.

IHC é igualmente o método preferido para estudar a expressão do ADN mitocondrial e nuclear do material genético, nas mitocôndria em amostras de tecido pequenas. Isto é feito pelos anticorpos que visam o ADN ou que visam as subunidades dos complexos chain respiratórios codificados pelo ADN mitocondrial e nuclear.

Em ajustes médicos, IHC pode ser usado diagnòstica para visar marcadores específicos das doenças e das circunstâncias. Por exemplo, os marcadores do tumor podem ser visados por IHC para diagnosticá-lo como benigno ou maligno, determine a fase do tumor, e para identificar o tipo da pilha.

Finalmente, na revelação da droga, IHC é usado para verificar a eficácia de uma droga. Isto pode ser feito pela detecção da actividade, ou visando para cima ou para baixo o regulamento dos marcadores da doença do alvo no tecido. Pode igualmente ser usado para prever respostas do tratamento ao tratar malignidades diferentes.

Fontes

Last Updated: Jan 3, 2019

Sara Ryding

Written by

Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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