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Técnicas (IHC) de proyección de imagen del Immunohistochemistry

El Immunohistochemistry (IHC) es una técnica de proyección de imagen para visualizar los antígenos en células. Los anticuerpos etiqueta atan para apuntar los antígenos en la célula a la imagen la distribución y la localización de proteínas específicas del interés.

Células cancerosas del pecho que se han visualizado usando el immunohistochemistry - foto tomada por David Litman

David Litman | Shutterstock

Los orígenes del immunohistochemistry (IHC)

El primer estudio usando IHC fue publicado en los años 40 en que los antígenos del estreptococo bacteriano pulmonía de la especie fueron descubiertos en los tejidos. Desde entonces, se han hecho una gran cantidad de progresos y varias diversas aproximaciones. Hoy, IHC representa un procedimiento rutinario bastante estándar, pero esencial en muchas fijaciones.

IHC convencional implica el manchar de secciones finas del tejido inmunológico; sin embargo, las técnicas recientes pueden automatizar la preparación y la coloración de la muestra. Las aproximaciones tradicionales utilizaron un mancha de óxido o color para un objetivo, pero los recientes desarrollos han fomentado el campo de IHC multicolor.

Metodología básica

Hay generalmente cuatro pasos que preceden la proyección de imagen de la muestra: preparación, extracción del antígeno, el cegar del fondo, y detección del objetivo. Porque la meta de IHC es localizar componentes celulares, la configuración del tejido y la morfología de la célula necesita ser preservada.

En todo caso, la sangre se debe quitar para quitar cualquier interferencia por los antígenos de la sangre con la detección del antígeno del objetivo, mientras que los tejidos son fijos, común en formalina y después embutir en cera de parafina. La fijación y el método el embutir es FFPE típicamente referida. El embutir permite que montan el tejido sea seccionado y.

Antes de la extracción del antígeno, la parafina de la FFPE necesita ser quitada para permitir que los anticuerpos reaccionen con el antígeno. La extracción sí mismo del antígeno se hace para asegurar los antígenos que se desenmascaran que han desarrollado los puentes del metileno entre las proteínas del método de FFPE. Esto es hecha típicamente calentando las secciones o digiriendo secciones del tejido.

Algunas moléculas endógeno de ocurrencia necesitan ser cegadas en IHC para evitar que él dé resultados positivos falsos. El cegar del fondo implica físicamente o químicamente cegando actividad enzimática de la biotina o. Sin embargo, la coloración del fondo se puede también causar por el atascamiento no específico del anticuerpo. Los sitios potenciales por lo tanto se ciegan antes del uso del anticuerpo.

Células de visualización después de IHC

Hay dos métodos principales de lograr la señal visual en IHC, llamados el método directo e indirecto. Ambo dirija y los métodos indirectos utilizan los anticuerpos para descubrir el antígeno del objetivo, pero la opción puede diferir dependiendo de abundancia del antígeno y de lectura deseada.

El método directo tiene el marcador, es decir la fluorescencia u otra, etiqueta en el anticuerpo que ata el antígeno. Con el método indirecto, un anticuerpo secundario es etiqueta, y éste secundario reacciona con el anticuerpo primario, que a su vez ata el antígeno. Mientras que el método directo salva tiempo, la señal del método indirecto se amplifica, haciéndolo mucho más efectivo.

Las muestras manchadas pueden ser reflejadas empleando la luz o la microscopia de fluorescencia. La microscopia confocal se puede aplicar a ciertos métodos de detección del anticuerpo, y rendirá a mayor detalle. En caso de conjuntos de datos grandes, el alto análisis de investigación contento se puede utilizar para cuantificar rápidamente los niveles de componentes celulares y para comparar datos de varias muestras.

¿Cuáles son los usos de IHC?

IHC se utiliza en el espectro entero de ciencias biológicas: investigación, diagnosis, y revelado biológicos de la droga. En la investigación biológica, IHC puede visualizar la organización del tejido, el revelado del órgano, y el apoptosis, para nombrar apenas algunos campos.

IHC es también el método preferido para estudiar la expresión de la DNA mitocondrial y nuclear del material genético, en mitocondrias en pequeñas muestras de tejido. Esto es hecha por los anticuerpos que apuntan la DNA o que apuntan las subunidades de los complejos de cadena respiratorios codificados por la DNA mitocondrial y nuclear.

En fijaciones médicas, IHC se puede utilizar diagnóstico para apuntar marcadores específicos de enfermedades y de condiciones. Por ejemplo, los marcadores del tumor se pueden apuntar por IHC para diagnosticarlo como benigno o malo, determine el escenario del tumor, y determinar el tipo de la célula.

Finalmente, en el revelado de la droga, IHC se utiliza para verificar la eficacia de una droga. Esto se puede hacer por la detección de la actividad, o apuntando hacia arriba o hacia abajo la regla de los marcadores de la enfermedad del objetivo en el tejido. Puede también ser utilizada para predecir reacciones del tratamiento al tratar diversas malignidades.

Fuentes

Last Updated: Jan 3, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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