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Amélioration de la qualité et du rendement de chromatographie

En chromatographie, les composantes d'un mélange sont séparées. Ceci est rendu possible parce que les différentes composantes agissent l'un sur l'autre avec le mobile et des phases solides différemment, ainsi étant maintenu sur le fléau (s'il grippe fortement à la phase solide) ou n'agissant pas l'un sur l'autre avec le fléau du tout.

Tubes contenant des échantillons pour la chromatographie - par hotsumCrédit d'image : hotsum/Shutterstock

Ces facteurs peuvent être changés de sorte que le procédé puisse être plus efficace en termes de combien de temps le passage prend et combien des réactifs sont exigés pour le passage de chromatographie. Cependant, des soins doivent être pris pour assurer la bonne définition.

Rendement de fléau

Afin de déterminer le rendement du fléau, et ainsi la capacité de la chromatographie d'obtenir la bonne définition, il y a deux facteurs il est important considérer que : maximum maximal et largeurs maximales.

Le maximum maximal est où la concentration du composé est la plus élevée, ayant pour résultat la plus grande crête. Là où le maximum maximal tombe pour deux composés différents dépend de la façon dont ils agissent l'un sur l'autre avec le fléau, ainsi que la façon dont ils agissent l'un sur l'autre avec la phase mobile.

La largeur maximale, ou comment au loin les crêtes sont, est concernée plus grand en chromatographie. Même si les maxima de deux crêtes sont bien résolus, si ces crêtes sont plus au loin, alors ceci pourrait affecter la définition des deux crêtes.

Afin de déterminer combien efficace un fléau de chromatographie est, l'équation suivante peut être appliquée :

N = 16 (t/w)r2

Ici, N est le nombre de plaques théoriques dans le fléau, où tr est le temps d'assemblage, ou combien de temps le composé est maintenu dans le fléau après que le mélange soit injecté, et W est la largeur maximale. La largeur maximale est mesurée en traçant une ligne de tangente et en mesurant la distance entre les remarques où la ligne de tangente croise la crête.

Qualité de la chromatographie

Les résultats des crêtes d'un étalage de chromatogramme habituellement, et la définition est combien deux crêtes coûtent capables être discernées entre eux. La définition est un facteur important pour considérer quand concevant une expérience concernant la chromatographie, et comme équation, la définition peut être manifestée As

R = (tr2 - t)r1    

    ½ (w1 + w2)

là où t = temps d'assemblage, et W = largeurs de la crête.

Par rapport au rendement de fléau, la valeur de N associe à la qualité du chromatogramme. Par exemple, si les crêtes se produisent tôt (c.-à-d. la valeur de tr dans l'équation de rendement est inférieure), et soyez grand (c.-à-d. la valeur de W est élevée), puis la valeur de N sera inférieure. L'opposé est également vrai. Un bon chromatogramme aurait une valeur du haut N basée sur le haut t et les valeursr basses de W dans l'équation de rendement.

Comment améliorer le rendement de chromatographie

Anticorps monoclonaux d'épuration

Les anticorps monoclonaux ont des utilisations multiples, telles que la diagnose, la thérapeutique, la purification de protéine et d'autres techniques moléculaires. Ceux-ci peuvent être produits par la culture cellulaire, ou in vitro, et ils doivent être épurés du liquide de culture cellulaire.

La protéine A est une protéine effectuée par une bactérie, le staphylocoque doré, qui grippe aux anticorps. Cette protéine peut pour cette raison être employée pour séparer des anticorps d'un échantillon mélangé, comme le liquide de culture cellulaire.

Pendant la fabrication des anticorps monoclonaux, du liquide de culture cellulaire est chargé sur un fléau de chromatographie avec la protéine A et le liquide est réussi par des périodes multiples. Ces fléaux ne sont pas bon marché, et représentent la majorité du coût de production d'anticorps monoclonal.

Purification de culture cellulaire

Mahajan a et autres développé une méthode continue où le liquide de culture cellulaire élué d'un fléau a été réussi dans une seconde, et puis en troisième fléau. Utilisant trois fléaux accrus la capacité de liaison de la chromatographie, ayant pour résultat un passage plus efficace.

Ceci a alors eu comme conséquence une réduction du temps pris pour faire fonctionner la chromatographie, étant donné que chaque fléau était chargé avec du liquide de culture cellulaire ou lavé.

Utilisant ce procédé non montré aucune diminution de la qualité de donner droit a purifié des anticorps comparés aux procédés qui sont employés actuel. Ainsi, ce procédé d'employer trois fléaux est simultanément plus de moyen efficace de purifier des anticorps de liquide de culture cellulaire.

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Last Updated: Oct 25, 2018

Dr. Maho Yokoyama

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Dr. Maho Yokoyama

Dr. Maho Yokoyama is a researcher and science writer. She was awarded her Ph.D. from the University of Bath, UK, following a thesis in the field of Microbiology, where she applied functional genomics to Staphylococcus aureus . During her doctoral studies, Maho collaborated with other academics on several papers and even published some of her own work in peer-reviewed scientific journals. She also presented her work at academic conferences around the world.

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