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Perfeccionar calidad y eficiencia de la cromatografía

En cromatografía, los componentes de una mezcla se separan. Esto se hace posible porque diversos componentes obran recíprocamente con el movible y las fases sólidas diferentemente, así siendo conservado en la olumna (si ata fuertemente a la fase sólida) o no obrando recíprocamente con la olumna en absoluto.

Tubos que contienen las muestras para la cromatografía - por hotsumHaber de imagen: hotsum/Shutterstock

Estos factores pueden ser cambiados de modo que el proceso pueda ser más eficiente en términos de cuánto tiempo la corrida toma y cuánto se requieren los reactivos para la corrida de la cromatografía. Sin embargo, el cuidado necesita ser tomado para asegurar la buena resolución.

Eficiencia de la olumna

Para determinar la eficiencia de la olumna, y así la capacidad de la cromatografía de conseguir la buena resolución, hay dos factores que son importantes considerar: máximo máximo y anchuras máximas.

El máximo máximo es donde está la más alta la concentración de la composición, dando por resultado el pico más grande. Donde el máximo máximo baja para dos diversas composiciones depende de cómo obran recíprocamente con la olumna, así como de cómo obran recíprocamente con la fase movible.

La anchura máxima, o cómo los picos están de par en par, es de mayor interés en cromatografía. Incluso si los máximos de dos picos son bien resueltos, si se convierten estos picos más de par en par, después éste pudo afectar a la resolución de los dos picos.

Para determinar cómo es eficiente es una olumna de cromatografía, la ecuación siguiente puede ser aplicada:

N = 16 (t/w)r2

Aquí, N es el número de placas teóricas en la olumna, donde estár el tiempo t de retención, o cuánto tiempo la composición se conserva en la olumna después de que se inyecte la mezcla, y w es la anchura máxima. La anchura máxima es medida drenando una línea de tangente y midiendo la distancia entre los puntos donde la línea de tangente cruza el pico.

Calidad de la cromatografía

Los resultados de picos de un despliegue del cromatógrama generalmente, y la resolución es cuánto pueden dos picos ser distinguido de uno a. La resolución es un factor importante para considerar cuando diseña un experimento que implica la cromatografía, y como ecuación, la resolución se puede visualizar como

R = (tr2 - t)r1    

    ½ (w1 + w2)

donde t = tiempos de retención, y w = anchuras del pico.

En relación a eficiencia de la olumna, el valor de N se relaciona con la calidad del cromatógrama. Por ejemplo, si ocurren los picos temprano (es decir el valor de tr en la ecuación de la eficiencia es inferior), y sea amplio (es decir el valor de w es alto), después el valor de N será inferior. El contrario es también verdad. Un buen cromatógrama tendría un alto valor de N basado en alto t y valoresr inferiores de w en la ecuación de la eficiencia.

Cómo perfeccionar eficiencia de la cromatografía

Anticuerpos monoclonales de la purificación

Los anticuerpos monoclonales tienen aplicaciones múltiples, tales como diagnósticos, terapéutica, purificación de la proteína y otras técnicas moleculares. Éstos se pueden producir por el cultivo celular, o in vitro, y necesitan ser purificadas del líquido del cultivo celular.

La proteína A es una proteína hecha por una bacteria, el estafilococo áureo, que ata a los anticuerpos. Esta proteína por lo tanto se puede utilizar para separar los anticuerpos de una muestra mezclada, como el líquido del cultivo celular.

Durante la manufactura de anticuerpos monoclonales, el líquido del cultivo celular se carga sobre una olumna de cromatografía con la proteína A y el líquido se pasa con épocas múltiples. Estas olumnas no son baratas, y explican a la mayoría del costo de producción del anticuerpo monoclonal.

Purificación del cultivo celular

Mahajan y otros desarrolló un método contínuo donde el líquido del cultivo celular enjuagado a partir de una olumna fue pasado a través en un segundo, y entonces en una tercera olumna. Usando tres olumnas crecientes la capacidad de enlace de la cromatografía, dando por resultado una corrida más eficiente.

Esto entonces dio lugar a una reducción en el tiempo llevado para funcionar con la cromatografía, debido al hecho de que cada olumna era cargada con el líquido del cultivo celular o lavada.

Usando este proceso no mostrado ninguna disminución de la calidad de resultar purificó los anticuerpos comparados a los procesos que se utilizan actualmente. Así, este proceso de usar tres olumnas es simultáneamente un más modo eficaz de purificar los anticuerpos del líquido del cultivo celular.

Fuentes

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Last Updated: Oct 25, 2018

Dr. Maho Yokoyama

Written by

Dr. Maho Yokoyama

Dr. Maho Yokoyama is a researcher and science writer. She was awarded her Ph.D. from the University of Bath, UK, following a thesis in the field of Microbiology, where she applied functional genomics to Staphylococcus aureus . During her doctoral studies, Maho collaborated with other academics on several papers and even published some of her own work in peer-reviewed scientific journals. She also presented her work at academic conferences around the world.

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