Perfeccionar el seguro de Biotherapeutics: Trazado del inhibidor de proteasa AEBSF con RPLC-UV

Los anticuerpos son los agentes altamente selectivos que se pueden utilizar para apuntar una variedad de cánceres y de infecciones patógenas en seres humanos. La producción del anticuerpo se realiza generalmente usando cultivo celular mamífero. Sin embargo, durante la producción, estas células producen las proteasas que degradan los anticuerpos, así necesitando el uso de los inhibidores de proteasa.

Los científicos del instituto de la salud nacional han demostrado un método para cuantificar un inhibidor de proteasa común, llamado AEBSF, por la cromatografía líquida inversa acoplada a la detección ULTRAVIOLETA (RPLC-UV) para evaluar la purificación del anticuerpo.

Anticuerpo en la sangreKateryna Kon | Shutterstock

Los anticuerpos representan un componente versátil del sistema inmune mamífero. Los anticuerpos inhiben la extensión de infecciones patógenas y permiten que el sistema inmune autorice infecciones. La selectividad de anticuerpos está de interés determinado para el revelado farmacéutico, pues los anticuerpos se pueden utilizar en terapias apuntadas. De hecho, varios anticuerpos monoclonales han sido aprobados para el uso medicinal por el FDA e investigan sobre anticáncer y los anticuerpos anti-VIH están progresando.

Un anticuerpo contra un patógeno determinado se determina una vez, e.g en un paciente que tenga inmunidad detectada, su serie puede ser resuelta, los vectores de la transfección se pueden ser preparados y el anticuerpo producir usando variedades de células transgénicas. Sin embargo, después de que se sintetice el anticuerpo, necesita ser protegido contra la maquinaria proteolítica del cultivo celular.

Un método común es agregar los agentes químicos que inhiben las proteasas. Mientras que esto perfecciona el rendimiento del anticuerpo, estos agentes necesitan ser quitados en río abajo el tramitación de modo que no contaminen el producto farmacéutico final. Para el control de calidad farmacéutico, los métodos rutinarios necesitan ser realizados para demostrar concordancia del producto.

Los científicos del programa vaccíneo de la producción de NIH en los E.E.U.U., llevados por el Dr. Paula Lei, tienen recientemente desarrollado un método para cuantificar el inhibidor de proteasa AEBSF (4 fluoruro del benzenesulfonyl (2-aminoethyl)) por la cromatografía líquida inversa con la detección ULTRAVIOLETA (RPLC-UV). Este inhibidor de proteasa se ha utilizado previamente con éxito para la producción “de anticuerpos ampliamente de neutralización” (bNAb) contra la variedad de virus de la inmunodeficiencia (HIV) humana 1.

Control de calidad de RPLC-UV para los métodos de la purificación

Los investigadores utilizaron la cromatografía inversa C18 con agua y el acetonitrilo tratados con ácido como disolventes. Con un tiempo de ejecución de 23 minutos, lograron la separación de AEBSF y de su producto de la hidrólisis, AEBS-OH ((2-aminoethyl) ácido benzenesulfonic 4).

Desde la señal del inhibidor de proteasa, AEBSF no era resuelto bien en muestras del cultivo celular debido a interferencia de otras composiciones, él hidrolizó la composición y logró activamente del > la conversión 99% a AEBS-OH dentro de una incubación de 2 horas.

Los investigadores utilizaron el método para analizar el inhibidor de proteasa en culturas de células produciendo el anticuerpo del bNAb y evaluaron los pasos subsiguientes de la purificación del anticuerpo. En primer lugar, probaron un método común para la purificación del anticuerpo basada en la cromatografía de afinidad de la proteína A.

En este método, los anticuerpos son conservados en una matriz de la cromatografía por el atascamiento específico con la proteína A, mientras que otras composiciones se pueden lavar lejos. En segundo lugar, probaron un método de la ultrafiltración adonde las pequeñas composiciones, tales como el inhibidor de proteasa, pasan a través de una matriz porosa mientras que se conservan los anticuerpos grandes.

Una solución eficiente

Con su nuevo método analítico, los investigadores demostraron que ambos la cromatografía de afinidad de la proteína A, y el método de la ultrafiltración eran eficientes purificar la fracción del anticuerpo del bNAb del inhibidor de proteasa. Su estudio sugirió que una purificación de dos etapas usando ambos métodos podría reducir la concentración de AEBSF y de su producto AEBS-OH de la hidrólisis por más el doblez de 18.000.

El estudio ofrece así un método analítico para asegurar la calidad del retiro de AEBSF de productos del anticuerpo. La nota de los investigadores, sin embargo, que AEBSF y AEBS-OH no se han examinado toxicológico todavía, que los medios él no se conocen hasta qué concentración pueden ser considerados segura para los seres humanos y cuánta residuo en la muestra purificada del anticuerpo sería aceptable. Así, el revelado adicional del método de la purificación será necesario.

Fuentes

Further Reading

Last Updated: Jul 18, 2019

Christian Zerfaß, Ph.D.

Written by

Christian Zerfaß, Ph.D.

Christian is an enthusiastic life scientist who wants to understand the world around us. He was awarded a Ph.D. in Protein Biochemistry from Johannes Gutenberg University in Mainz, Germany, in 2015, after which he moved to Warwick University in the UK to become a post-doctoral researcher in Synthetic Biology.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Zerfaß, Christian. (2019, July 18). Perfeccionar el seguro de Biotherapeutics: Trazado del inhibidor de proteasa AEBSF con RPLC-UV. News-Medical. Retrieved on November 17, 2019 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Improving-the-Safety-of-Biotherapeutics-Tracing-the-Protease-Inhibitor-AEBSF-with-RPLC-UV.aspx.

  • MLA

    Zerfaß, Christian. "Perfeccionar el seguro de Biotherapeutics: Trazado del inhibidor de proteasa AEBSF con RPLC-UV". News-Medical. 17 November 2019. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Improving-the-Safety-of-Biotherapeutics-Tracing-the-Protease-Inhibitor-AEBSF-with-RPLC-UV.aspx>.

  • Chicago

    Zerfaß, Christian. "Perfeccionar el seguro de Biotherapeutics: Trazado del inhibidor de proteasa AEBSF con RPLC-UV". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Improving-the-Safety-of-Biotherapeutics-Tracing-the-Protease-Inhibitor-AEBSF-with-RPLC-UV.aspx. (accessed November 17, 2019).

  • Harvard

    Zerfaß, Christian. 2019. Perfeccionar el seguro de Biotherapeutics: Trazado del inhibidor de proteasa AEBSF con RPLC-UV. News-Medical, viewed 17 November 2019, https://www.news-medical.net/life-sciences/Improving-the-Safety-of-Biotherapeutics-Tracing-the-Protease-Inhibitor-AEBSF-with-RPLC-UV.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News-Medical.Net.
Post a new comment
Post