Analyses in vitro d'angiogenèse

L'angiogenèse représente la formation des vaisseaux sanguins neufs (par l'intermédiaire de la germination ou d'être branché) de celles existantes. Ce procédé est impliqué dans la croissance tumorale et la métastase, ainsi son inhibition est souvent un point critique d'intervention dans la demande de règlement des malignités.

Les cellules endothéliales doivent entreprendre quatre étapes essentielles afin de former les vaisseaux sanguins neufs. Tels sont dégradation de la modification adjacente, transfert vers les stimulus angiogéniques, prolifération pour produire les cellules complémentaires pour que les vaisseaux sanguins neufs, ainsi que la réorganisation forme des structures du récipient 3D.

Le développement des analyses d'angiogenèse était une opération pivotalement dans la découverte des molécules proangiogenic et d'antiangiogénique. Parmi elles, les analyses in vitro ont été quantitatives et expéditives en tant qu'approximations initiales qui justifient davantage de confirmation in vivo.

Caractéristiques des analyses in vitro

Une majorité d'analyses de cellule endothéliale utilisent les cellules endothéliales humaines de veine ombilicale ou les cellules endothéliales aortiques bovines - pas parce que ces types de cellules sont de bons préposés du service des conditions vasculaires in vivo, mais principalement parce qu'il est relativement facile les moissonner de grands vaisseaux sanguins.

Il doit mettre l'accent sur qu'il y a des différences parmi des cellules endothéliales de grand et des petits vaisseaux sanguins, ainsi que de différents organes. En outre, cellules endothéliales qui sont employées dans des états de laboratoire sont fondamentalement toujours dans une condition proliférative plutôt que l'état de repos normal du réseau vasculaire déterminé.

L'autre sujet est les conditions environnementales en lesquelles des cellules endothéliales sont cultivées. À l'organisme vivant, des cellules endothéliales sont exposées à une pléthore de forces hémodynamiques qui activent des voies multiples de signalisation. D'autre part, des cellules endothéliales dans le laboratoire sont habituellement cultivées en air de chambre, qui est hyperoxic avec in vivo les tensions de l'oxygène (particulièrement dans la microcirculation).

En outre, in vivo l'interaction entre les cellules endothéliales et d'autres types de cellules (tels que des fibroblastes, des pericytes et des macrophages) est encombrante pour traduire et simuler in vitro. Par conséquent in vitro des analyses d'angiogenèse devraient être vues comme point de départ plutôt qu'un point final pour la découverte.

Types d'analyses in vitro

Il y a une myriade de méthodes in vitro bien établies pour étudier la prolifération cellulaire. Le plus fiable parmi elles prévoit la prolifération par la mesure directe de la synthèse d'ADN, et l'analyse de constitution de thymidine est souvent citée comme modèle de référence.

L'analyse BrdU de constitution de thymidine offert par une compagnie Fisher thermo scientifique comprend un analogue de nucléoside qui est recensé pendant la synthèse d'ADN active en utilisant l'immunohistochimie. Cette entreprise a également développé l'analyse d'EdU Microplate de Claquement-service informatique qui utilise le nucléoside EdU analogique (5-ethynyl-2'-deoxyuridine) et une méthode de dépistage qui ne rend pas nécessaire la dénaturation d'ADN.

Dans quelques types d'angiogenèse, les cellules endothéliales dégradent la membrane basale et émigrent le long des gradients chimiques précédemment déterminés par des facteurs de croissance proangiogenic. L'analyse de transfert de transwell (une modification de l'analyse classique de chambre de Boyden) est fréquemment utilisée pour évaluer la migration des cellules endothéliales, qui est l'une des analyses in vitro principales dans le répertoire de Fisher thermo scientifique.

24- ou la garniture intérieure du BD FluoroBlok de 96 multipuits (avec la taille de pore de 3 μm) enduite de la fibronectine humaine a été développée par des biosciences du BD de compagnie, et sert également d'analyse de migration des cellules. D'autres variantes des analyses de transfert comprennent l'analyse d'analyse de sous-agarose, de frontière de sécurité de teflon, l'analyse de cicatrisation et l'analyse phagokinetic de piste.

Un des tests hautement spécifiques pour l'angiogenèse évalue la propension des cellules endothéliales de former les structures 3D (également connues sous le nom de formation de tube). Au moment où, les analyses de formation de tube les plus populaires concernent plaquer les cellules endothéliales humaines de veine ombilicale ou les cellules endothéliales aortiques bovines avec Matrigel.

L'analyse aortique d'angiogenèse de sonnerie est très utilisée dans la recherche d'angiogenèse due au son sérieux et reproductibilité. D'autres analyses in vitro d'angiogenèse qui couvrent tous les fonctionnements angiogéniques (c.-à-d. prolifération, transfert, formation de tube) comprennent l'analyse métatarsienne de souris, l'analyse d'embryoid et d'autres.

Last Updated: Aug 23, 2018

Dr. Tomislav Meštrović

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Dr. Tomislav Meštrović

Dr. Tomislav Meštrović is a medical doctor (MD) with a Ph.D. in biomedical and health sciences, specialist in the field of clinical microbiology, and an Assistant Professor at Croatia's youngest university - University North. In addition to his interest in clinical, research and lecturing activities, his immense passion for medical writing and scientific communication goes back to his student days. He enjoys contributing back to the community. In his spare time, Tomislav is a movie buff and an avid traveler.

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