In vitro ensaios da angiogênese

A angiogênese representa a formação de vasos sanguíneos novos (através de brotar ou da ramificar) dos existências. Este processo é envolvido no crescimento e na metástase do tumor, assim sua inibição é frequentemente um ponto crítico da intervenção no tratamento das malignidades.

As pilhas Endothelial precisam de empreender quatro etapas cruciais a fim formar vasos sanguíneos novos. Aquelas são degradação da matriz adjacente, migração para os estímulos angiogenic, proliferação para criar pilhas adicionais para que os vasos sanguíneos novos, assim como a reorganização forme estruturas da embarcação 3D.

A revelação de ensaios da angiogênese era uma etapa giratória na descoberta de moléculas proangiogenic e antiangiogenic. Entre elas, in vitro os ensaios foram quantitativos e rápidos como as aproximações iniciais que justificam uma confirmação mais adicional in vivo.

Características in vitro de ensaios

Uma maioria de ensaios endothelial da pilha utiliza pilhas endothelial humanas da veia de cordão umbilical ou pilhas endothelial aórticas bovinas - não porque estes tipos de pilhas são bons representantes de circunstâncias vasculares in vivo, mas primeiramente porque são relativamente fáceis de colher dos grandes vasos sanguíneos.

Deve-se sublinhar que há umas diferenças entre pilhas endothelial dos grandes e vasos sanguíneos pequenos, assim como dos órgãos diferentes. Além disso, pilhas endothelial que são usadas em condições do laboratório estão basicamente sempre em um estado proliferative um pouco do que o estado quieto normal do vasculature estabelecido.

Outros tema são as circunstâncias ambientais em que as pilhas endothelial são cultivadas. No organismo vivo, as pilhas endothelial são expor a uma pletora de forças hemodynamic que activam caminhos múltiplos da sinalização. Por outro lado, as pilhas endothelial no laboratório são cultivadas geralmente no ar da sala, que é hyperoxic comparado com in vivo as tensões do oxigênio (especialmente no microcirculation).

Além disso, in vivo a interacção entre pilhas endothelial e outros tipos das pilhas (tais como fibroblasto, pericytes e macrófagos) é incómoda traduzir in vitro e simular. Conseqüentemente in vitro os ensaios da angiogênese devem ser vistos como um ponto de partida um pouco do que um valor-limite para a descoberta.

Tipos in vitro de ensaios

Há uma miríade in vitro de métodos bem conhecidos para estudar a proliferação de pilha. O mais seguro entre eles calcula a proliferação pela medida directa da síntese do ADN, e o ensaio da incorporação do thymidine é mencionado frequentemente como um modelo de referência.

O ensaio BrdU da incorporação do Thymidine oferecido por uma empresa Fisher Thermo científico inclui um analog do nucleoside que seja identificado durante a síntese activa do ADN empregando o immunohistochemistry. Esta empresa igualmente desenvolveu-o Clique-o ensaio de EdU Microplate que utiliza o nucleoside EdU análogo (5-ethynyl-2'-deoxyuridine) e um método de detecção que não necessite a desnaturação do ADN.

Em alguns tipos de angiogênese, as pilhas endothelial degradam a membrana do porão e migram-na ao longo dos inclinações químicos estabelecidos previamente por factores de crescimento proangiogenic. O ensaio da migração do transwell (uma alteração do ensaio clássico da câmara de Boyden) é utilizado freqüentemente para avaliar a migração endothelial da pilha, que é um do cano principal in vitro analisa no repertório de Fisher Thermo científico.

24- ou a inserção do BD FluoroBlok de 96 multiwell (com tamanho do poro de 3 μm) revestida com o fibronectin humano foi desenvolvida por ciências biológicas de um BD da empresa, e igualmente serve como um ensaio da migração da pilha. Outras variações de ensaios da migração incluem o ensaio do ensaio do sob-agarose, da cerca do Teflon, o ensaio cura da ferida e o ensaio phagokinetic da trilha.

Um dos testes altamente específicos para a angiogênese está avaliando a propensão de pilhas endothelial formar as estruturas 3D (igualmente conhecidas como a formação da câmara de ar). No momento em que, os ensaios os mais populares da formação da câmara de ar envolvem chapear pilhas endothelial humanas da veia de cordão umbilical ou pilhas endothelial aórticas bovinas com o Matrigel.

O ensaio aórtico da angiogênese do anel é amplamente utilizado na pesquisa da angiogênese devido a suas confiança e reprodutibilidade. Outros in vitro ensaios da angiogênese que cobrem todas as funções angiogenic (isto é proliferação, migração, formação da câmara de ar) incluem o ensaio metatársico do rato, o ensaio do embryoid e o outro.

Fontes

  1. http://www.clinchem.org/content/49/1/32.full
  2. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3646220/
  3. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2692317/
  4. http://www.bdbiosciences.com/documents/webinar_2010_05_angiogenesis.pdf
  5. http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download?doi=10.1.1.15.6731&rep=rep1&type=pdf
  6. https://www.thermofisher.com/hr/en/home/references/protocols/cell-and-tissue-analysis/cell-profilteration-assay-protocols/angiogenesis-protocols.html
  7. TH de Adair, Montani JP. Angiogênese. Morgan & ciências da vida de Claypool, 2011; pp. 9-18.

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Last Updated: Aug 23, 2018

Dr. Tomislav Meštrović

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Dr. Tomislav Meštrović

Dr. Tomislav Meštrović is a medical doctor (MD) with a Ph.D. in biomedical and health sciences, specialist in the field of clinical microbiology, and an Assistant Professor at Croatia's youngest university - University North. In addition to his interest in clinical, research and lecturing activities, his immense passion for medical writing and scientific communication goes back to his student days. He enjoys contributing back to the community. In his spare time, Tomislav is a movie buff and an avid traveler.

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