Análisis ines vitro del Angiogenesis

El Angiogenesis representa la formación de nuevos vasos sanguíneos (vía el brote o ramificarse) los existencias. Este proceso está implicado en incremento y metástasis del tumor, así su inhibición es a menudo un punto crítico de la intervención en el tratamiento de malignidades.

Las células endoteliales necesitan emprender cuatro pasos cruciales para formar los nuevos vasos sanguíneos. Ésas son degradación de la matriz adyacente, migración hacia los estímulos angiogénicos, proliferación para crear las células adicionales para que los nuevos vasos sanguíneos, así como la reorganizaci n formen las estructuras del buque 3D.

El revelado de los análisis del angiogenesis era un paso giratorio en el descubrimiento de moléculas proangiogenic y antiangiogenic. Entre ellas, los análisis ines vitro han sido cuantitativos y expeditivos como aproximaciones iniciales que autorizan la confirmación adicional in vivo.

Características de análisis ines vitro

Una mayoría de análisis endoteliales de la célula utiliza las células endoteliales humanas de la vena umbilical o las células endoteliales aórticas bovinas - no porque estos tipos de células son buenos representantes de condiciones vasculares in vivo, pero sobre todo porque son relativamente fáciles de cosechar de los vasos sanguíneos grandes.

Debe ser acentuado que hay diferencias entre las células endoteliales de los vasos sanguíneos grandes y pequeños, así como de diversos órganos. Además, células endoteliales que se utilizan en condiciones del laboratorio están básicamente siempre en un estado proliferativo bastante que el estado quieto normal de la vasculatura establecida.

El otro tema es las condiciones ambientales en las cuales se cultivan las células endoteliales. En el organismo vivo, las células endoteliales se exponen a una plétora de fuerzas hemodinámicas que activen caminos múltiples de la transmisión de señales. Por otra parte, las células endoteliales en el laboratorio se cultivan generalmente en el aire del sitio, que es hyperoxic comparado con in vivo las tensiones del oxígeno (especialmente en la microcirculación).

Además, in vivo la acción recíproca entre las células endoteliales y otros tipos de las células (tales como fibroblastos, pericytes y macrófagos) es incómoda traducir y simular in vitro. Por lo tanto in vitro los análisis del angiogenesis se deben ver como punto de partida bastante que una punto final para el descubrimiento.

Tipos de análisis ines vitro

Hay una miríada de los métodos ines vitro establecidos para estudiar la proliferación de célula. El más seguro entre ellos calcula la proliferación por la medición directa de la síntesis de la DNA, y el análisis de la incorporación de la timidina se cita a menudo como modelo de referencia.

El análisis BrdU de la incorporación de la timidina ofrecido por una compañía Fisher termo científico incluye un análogo del nucleósido que sea determinado durante síntesis activa de la DNA empleando el immunohistochemistry. Esta empresa también lo desarrolló Tecleo-el análisis de EdU Microplate que utiliza el nucleósido EdU analógico (5-ethynyl-2'-deoxyuridine) y un método de detección que no necesite la desnaturalización de la DNA.

En algunos tipos de angiogenesis, las células endoteliales degradan la membrana del sótano y emigran a lo largo de los gradientes químicos establecidos previamente por factores de incremento proangiogenic. El análisis de la migración del transwell (una modificación del análisis clásico de la cámara de Boyden) se utiliza con frecuencia para fijar la migración endotelial de la célula, que es uno de los análisis ines vitro principales en el repertorio de Fisher termo científico.

24- o la pieza inserta de BD FluoroBlok de 96 multiwell (con talla del poro de 3 μm) recubierta con fibronectin humano fue desarrollada por ciencia biológicas de BD de la compañía, y también sirve como análisis de la migración de la célula. Otras variantes de los análisis de la migración incluyen el análisis de la bajo-agarosa, análisis de la cerca del Teflon, hieren análisis curativo y análisis phagokinetic del carril.

Una de las pruebas altamente específicas para el angiogenesis está fijando la propensión de células endoteliales a formar las estructuras 3D (también conocidas como formación del tubo). En el momento que, los análisis más populares de la formación del tubo implican el chapar de las células endoteliales humanas de la vena umbilical o de las células endoteliales aórticas bovinas con Matrigel.

El análisis aórtico del angiogenesis del anillo es ampliamente utilizado en la investigación del angiogenesis debido a su confiabilidad y reproductibilidad. Otros análisis ines vitro del angiogenesis que revisten todas las funciones angiogénicas (es decir proliferación, migración, formación del tubo) incluyen análisis metatarsiano del ratón, análisis del embryoid y otros.

Fuentes

  1. http://www.clinchem.org/content/49/1/32.full
  2. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3646220/
  3. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2692317/
  4. http://www.bdbiosciences.com/documents/webinar_2010_05_angiogenesis.pdf
  5. http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download?doi=10.1.1.15.6731&rep=rep1&type=pdf
  6. https://www.thermofisher.com/hr/en/home/references/protocols/cell-and-tissue-analysis/cell-profilteration-assay-protocols/angiogenesis-protocols.html
  7. TH de Adair, Montani JP. Angiogenesis. Morgan y ciencias de la vida de Claypool, 2011; págs. 9-18.

[Lectura adicional: Angiogenesis]

Last Updated: Aug 23, 2018

Dr. Tomislav Meštrović

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Dr. Tomislav Meštrović

Dr. Tomislav Meštrović is a medical doctor (MD) with a Ph.D. in biomedical and health sciences, specialist in the field of clinical microbiology, and an Assistant Professor at Croatia's youngest university - University North. In addition to his interest in clinical, research and lecturing activities, his immense passion for medical writing and scientific communication goes back to his student days. He enjoys contributing back to the community. In his spare time, Tomislav is a movie buff and an avid traveler.

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