Production industrielle des anticorps

La préparation industrielle des anticorps exige des efforts pour produire les lignées cellulaires stables et les quantités commercialement viables d'anticorps purs. Ces anticorps sont alors employés pour la diagnose, en microbiologie moléculaire ou même comme demande de règlement pour certaines conditions médicales.

Anticorps humain (immunoglobuline). illustration 3D. Crédit d
Anticorps humain (immunoglobuline). illustration 3D. Crédit d'image : Tatiana Shepeleva/Shutterstock

Méthodes in vitro

Dans la méthode in vitro, des anticorps sont produits suivre la méthode d'hybridome, où des cellules d'hybridome sont produites en protégeant par fusible des cellules de myélome et des lymphocytes B. Ces lymphocytes peuvent être d'une souris ou d'un rat. L'antigène d'objectif est injecté à l'animal, et l'animal est immunisé ainsi contre l'antigène. Après que l'animal ait produit des anticorps, les lymphocytes sont extraits et protégés par fusible avec les cellules myéloïdes pour produire des hybridomes. Cette lignée cellulaire d'hybridome est alors développée et in vitro multipliée. Ils sécrètent des anticorps dedans au milieu de culture, duquel ils sont isolés et rassemblés.

Après vérification la contamination, la culture cellulaire d'hybridome est augmentée dans une bouteille de rouleau ou des cultures de suspension agitées de cellules où ils sont devenus une densité de cellules de 1-2 X105 cells/mL. Ils sont encore cultivés pendant des semaines et surveillés pour vérifier leur accroissement. Les cellules d'hybridome sont alors centrifugées à 3000-4000rpm pour que mn 15 les sépare du milieu de culture. L'anticorps est rassemblé, et est puis envoyé pour davantage de purification. Les méthodes in vitro peuvent produire d'une puissance d'anticorps de 15-50mg/L.

Avantages et désavantages de la méthode in vitro

La méthode in vitro fournit la souplesse de l'écaille de production, qui peut s'échelonner du milligramme aux grammes. Elle a un niveau de pureté de >95% des anticorps avec des traces de contamination d'IgG, et elle est rentable. Cependant, avec l'augmentation de la quantité de production d'anticorps, le coût de production in vitro peut monter. Basé sur les lignées cellulaires, les coûts de production in vitro peuvent être 0,5 à 6 méthodes de périodes plus haut qu'in vivo.

In vivo méthodes

Les premières étapes in vivo de la production de l'anticorps est assimilée à la méthode in vitro, où l'antigène est injecté dedans à un animal tel que la souris ou le rat. Après que l'animal produise des anticorps, les lymphocytes sont extraits pour être protégés par fusible avec des cellules de myélome et des hybridomes sont produits. Dans la prochaine opération, l'extension des cellules copiées d'hybridome est faite chez la souris ou le rat contrairement à une culture de suspension utilisée dans la méthode in vitro. Autour de l'hybridome 1X 106 des cellules sont injectées dedans à la cavité péritonéale de chaque souris. Ces cellules d'hybridome augmentent chez les souris comme tumeurs d'ascite pour 7-10days, puis l'ascite est moissonnée. Les autres composants de cellule et lipidiques sont séparés par centrifugation pour rassembler des anticorps.

Avantages et désavantages in vivo de la méthode

L'utilisation des animaux dans in vivo la méthode mène au rétablissement de grandes quantités d'anticorps d'une façon facile. Elle peut également être employée pour augmenter les hybridomes qui exécutent mauvais dans des conditions in vitro. Cependant, cette méthode exige les installations animales adéquates, et le régime de la contamination peut être élevé. En outre, cette méthode est douloureuse pour les animaux, qui peuvent soulever les questions bioéthiques.

Bioréacteurs creux de fibre

Dans un bioréacteur creux de fibre, des cellules d'hybridome sont développées dans un compartiment où le support frais peut être ajouté continuement pour réduire l'accumulation de dérivés toxiques. Cette méthode permet la production de la forte concentration d'anticorps.

Purification des anticorps

Des anticorps produits par l'un ou l'autre de méthode doit être soumis à la purification avant leur utilisation. Cette opération des méthodes comprend de centrifugation, de filtrage, et autre isolement. Dans la centrifugation, des cellules et les éclats entiers de cellules peuvent être séparés de la solution.

Par la suite, elle peut être réussie par un fléau de chromatographie d'échange ionique, où les anticorps peuvent être séparés en grippant aux ligands spécifiques. Les anticorps précipitent aux concentrations ioniques inférieures, et ce principe peut également être employé pour les isoler.  Pour séparer des anticorps, basés sur leur taille, l'électrophorèse peut être employée.

Sources :

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Last Updated: Oct 28, 2018

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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