Produção industrial de anticorpos

A preparação industrial dos anticorpos exige esforços para produzir linha celular estáveis e quantidades comercialmente viáveis de anticorpos puros. Estes anticorpos são usados então para diagnósticos, na microbiologia molecular ou mesmo como problemas médicos de um tratamento com certeza.

Anticorpo humano (imunoglobulina). ilustração 3D. Crédito de imagem: Tatiana Shepeleva/Shutterstock
Anticorpo humano (imunoglobulina). ilustração 3D. Crédito de imagem: Tatiana Shepeleva/Shutterstock

In vitro métodos

In vitro no método, os anticorpos são produzidos usando o método do hybridoma, onde as pilhas do hybridoma são geradas fundindo pilhas e B-linfócitos do mieloma. Estes linfócitos podem ser de um rato ou de um rato. O antígeno do alvo é injectado ao animal, e o animal é imunizado assim contra o antígeno. Depois que o animal gerou anticorpos, os linfócitos estão extraídos e fundidos com pilhas mielóides para criar hybridomas. Esta linha celular do hybridoma então é crescida e multiplicada in vitro. Segregam anticorpos dentro ao media de cultura, de que são isolados e recolhidos.

Após a verificação para ver se há a contaminação, a cultura celular do hybridoma é expandida em uma garrafa do rolo ou em umas culturas de suspensão agitados da pilha onde sejam vindos uma densidade de pilha de 1-2 X105 cells/mL. São cultivados mais por semanas e monitorados para verificar seu crescimento. As pilhas do hybridoma são centrifugadas então em 3000-4000rpm para que o minuto 15 separe-o do media de cultura. O anticorpo é recolhido, e enviado então para uma purificação mais adicional. In vitro os métodos podem gerar um rendimento do anticorpo de 15-50mg/L.

Vantagens e desvantagens in vitro do método

In vitro o método fornece a flexibilidade da escala da produção, que pode variar do miligrama aos relvados. Tem um nível da pureza de >95% de anticorpos com quantidades de traço de contaminação de IgG, e é eficaz na redução de custos. Contudo, com uma quantidade crescente de produção do anticorpo, o custo in vitro da produção pode aumentar. Baseado nas linha celular, in vitro os custos de gastos de fabricação podem ser 0,5 a 6 métodos das épocas mais altamente do que in vivo.

In vivo métodos

Os passos iniciais in vivo da produção de anticorpo são similares in vitro ao método, onde o antígeno é injectado dentro a um animal tal como o rato ou o rato. Depois que o animal gera anticorpos, os linfócitos estão extraídos para ser fundidos com pilhas do mieloma e os hybridomas são gerados. No passo seguinte, a expansão das pilhas clonadas do hybridoma é feita no rato ou no rato em contraste com uma cultura de suspensão usada in vitro no método. Em torno do hybridoma 1X 106 as pilhas são injectadas dentro à cavidade peritoneaa de cada rato. Estas pilhas do hybridoma expandem nos ratos como tumores das ascites para 7-10days, a seguir as ascites são colhidas. As outras pilhas e componentes de lipido são separados pela centrifugação para recolher anticorpos.

Vantagens e desvantagens in vivo do método

O uso dos animais in vivo no método conduz à geração de grandes quantidades de anticorpos em uma maneira fácil. Pode igualmente ser usado para expandir os hybridomas que executam deficientemente in vitro em circunstâncias. Contudo, este método exige facilidades animais adequadas, e a taxa de contaminação pode ser alta. Também, este método é doloroso para os animais, que podem levantar edições bio-éticas.

Bioreactores ocos da fibra

Em um bioreactor oco da fibra, as pilhas do hybridoma são crescidas em um compartimento onde o media fresco possa ser adicionado continuamente para reduzir a acumulação de subprodutos tóxicos. Este método permite a produção de concentração alta de anticorpos.

Purificação dos anticorpos

Os anticorpos produzidos por um ou outro método têm que ser sujeitados à purificação antes de seu uso. Esta etapa inclui métodos do isolamento da centrifugação, da filtração, e o outro. Na centrifugação, as pilhas e os fragmentos inteiros da pilha podem ser separados da solução.

Subseqüentemente, pode ser passada através de uma coluna de cromatografia da troca iónica, onde os anticorpos possam ser separados ligando às ligantes específicas. Os anticorpos precipitados em baixas concentrações iónicas, e este princípio podem igualmente ser usados para isolá-las.  Para separar anticorpos, com base em seu tamanho, a electroforese pode ser usada.

Fontes:

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Last Updated: Oct 28, 2018

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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