Producción industrial de anticuerpos

La preparación industrial de anticuerpos requiere esfuerzos de producir variedades de células estables y cantidades comercialmente viables de anticuerpos puros. Estos anticuerpos entonces se utilizan para los diagnósticos, en microbiología molecular o aún como dolencias de un tratamiento con certeza.

Anticuerpo humano (inmunoglobulina). ejemplo 3D. Haber de imagen: Tatiana Shepeleva/Shutterstock
Anticuerpo humano (inmunoglobulina). ejemplo 3D. Haber de imagen: Tatiana Shepeleva/Shutterstock

Métodos ines vitro

En el método in vitro, los anticuerpos se producen usando el método del hibridoma, donde las células del hibridoma son generadas fundiendo las células y los B-linfocitos del mieloma. Estos linfocitos pueden ser de un ratón o de una rata. El antígeno del objetivo se inyecta al animal, y el animal se inmuniza así contra el antígeno. Después de que el animal haya generado los anticuerpos, los linfocitos se extraen y se funden con las células mieloides para crear los hibridomas. Esta variedad de células del hibridoma después se crece y se multiplica in vitro. Secretan los anticuerpos hacia adentro al medio de cultivo, del cual los aíslan y cerco.

Después de verificar para saber si hay contaminación, el cultivo celular del hibridoma se despliega en una botella del rodillo o las culturas de suspensión agitadas de la célula donde los vienen una densidad de célula de 1-2 X105 cells/mL. Los cultivan más a fondo por semanas y se vigilan para verificar su incremento. Las células del hibridoma entonces se centrifugan en 3000-4000rpm para que el minuto 15 lo separe del medio de cultivo. El anticuerpo cerco, y después se envía para la purificación adicional. Los métodos ines vitro pueden generar un rendimiento del anticuerpo de 15-50mg/L.

Ventajas y desventajas del método in vitro

El método in vitro ofrece la adaptabilidad de la escala de la producción, que puede colocar de miligramo a los gramos. Tiene un nivel de la pureza del >95% de anticuerpos con cantidades de trazo de contaminación de IgG, y es de poco costo. Sin embargo, con el aumento de la cantidad de producción del anticuerpo, el costo de producción in vitro puede subir. De acuerdo con las variedades de células, los costos de producción ines vitro pueden ser 0,5 a 6 métodos de las épocas más arriba que in vivo.

In vivo métodos

Los pasos iniciales in vivo de la producción de anticuerpo son similares al método in vitro, donde el antígeno se inyecta hacia adentro a un animal tal como ratón o rata. Después de que el animal genere los anticuerpos, los linfocitos se extraen para ser fundidos con las células del mieloma y se generan los hibridomas. En el paso siguiente, la extensión de las células reproducidas del hibridoma se hace en el ratón o la rata en contraste con una cultura de suspensión usada en el método in vitro. Alrededor del hibridoma 1X 106 las células se inyectan hacia adentro a la cavidad peritoneal de cada ratón. Estas células del hibridoma se despliegan en ratones como tumores de las ascitis para 7-10days, después se cosechan las ascitis. Las otras células y componentes de lípido son separados por la centrifugación para cerco los anticuerpos.

Ventajas y desventajas in vivo del método

El uso de animales en in vivo método lleva a la generación de una gran cantidad de anticuerpos de una manera fácil. Puede también ser utilizado para desplegar los hibridomas que se realizan mal en condiciones ines vitro. Sin embargo, este método requiere instalaciones animales adecuadas, y el índice de contaminación puede ser alto. También, este método es doloroso para los animales, que pueden plantear cuestiones bioéticas.

Biorreactores huecos de la fibra

En un biorreactor hueco de la fibra, las células del hibridoma se crecen en una división donde el ambiente fresco se puede agregar contínuo para reducir la acumulación de subproductos tóxicos. Este método permite la producción de alta concentración de anticuerpos.

Purificación de anticuerpos

Los anticuerpos producidos por cualquier método tienen que ser sujetados a la purificación antes de su uso. Este paso incluye los métodos del aislamiento de la centrifugación, de la filtración, y otro. En la centrifugación, las células y los fragmentos enteros de la célula se pueden separar de la solución.

Posteriormente, puede ser pasada a través de una olumna de cromatografía de intercambio iónico, donde los anticuerpos pueden ser separados atando a los ligands específicos. Los anticuerpos se precipitan en las concentraciones iónicas inferiores, y este principio se puede también utilizar para aislarlas.  Para separar los anticuerpos, sobre la base de su talla, la electroforesis puede ser utilizada.

Fuentes:

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Last Updated: Oct 28, 2018

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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