Factores de interferência no projecto do ensaio

Há diversos factores que podem afectar a sensibilidade e a confiança de um ensaio. Estes devem ser considerados ao selecionar um sistema da amplificação da detecção ou do sinal.

Por media médicos de AlilaCrédito de imagem: Media médicos de Alila/Shutterstock

A escala do ensaio

Um da maioria de passos críticos no projecto do ensaio é ajustar-se da sensibilidade. A concentração do analyte do alvo deve cair dentro de uma escala das concentrações onde a resposta do ensaio é directamente proporcional à concentração.

Acima ou abaixo desta escala, os dados quantitativos em relação à concentração de uma molécula não podem confiantemente ser pressupor, e assim que a amostra exige etapas da concentração ou da diluição.

Fluorescência

Um readout fluorescente confia na interacção entre o analyte do alvo em uma amostra e uma molécula integrada no ensaio, que produz ou impede a produção de luz de um comprimento de onda e de uma intensidade particulares quando reunido. A presença e a concentração de uma molécula podem ser determinadas monitorando estas interacções.

Contudo, é importante assegurar-se de que a amostra a ser analisada igualmente não contenha outras moléculas capazes da interacção com o fluoróforo contido dentro do ensaio, com a excitação ou extinguir.

Este é o mais geralmente um problema quando os lysates brutos da pilha, os homogenates do tecido, ou outros espécimes biológicos não processados são o assunto da investigação. Pode igualmente ser induzido pela selecção deficiente dos componentes, tais como agentes de diminuição ou detergentes, como usado em alguns ensaios da proteína.

Nos ensaios enzimáticos ou celulares fluorogenic, usados para a selecção composta e perfilando finalidades, os compostos tais como este eles mesmos brilhariam, assim dando um sinal do falso positivo, ou indique alternativamente a actividade inibitório onde nenhum existe realmente.

A interferência fluorescente tal como esta pode ser reduzida usando os repórteres fluorescentes que excitam e se emitem em uns comprimentos de onda mais longos do que as moléculas encontradas em um ambiente biológico.

Amplificação enzimático

A amplificação enzimático é usada freqüentemente ao trabalhar com biomoléculas que são capazes da auto-montagem de um molde, tal como o ADN ou o RNA. Isto melhora o tamanho da amostra maciça, permitindo grandes aumentos na confiança e sensibilidade, contudo, igualmente aumenta a possibilidade de introduzir o erro exponencial nos resultados obtidos.

A confiança que os ensaios enzymatically-acoplados não medem inadvertidamente uma molécula a não ser o analyte do alvo é segurança essencial, mas mais adicional que se acoplar produz realmente a inibição durante ensaios da selecção é apenas como importante.

Isto é porque as enzimas podem entrar o contacto para produzir ou extinguir a fluorescência, mas não realmente permanentemente os pares, produzindo desse modo um falso positivo. As etapas tais como a precipitação (immuno) ou a purificação parcial devem ser consideradas se as espécies de competência são suspeitadas estam presente em uma amostra.

Outros factores

O número e a variedade de factores que afetam a precisão e a confiança dos ensaios são inteiramente dependentes da amostra e do ensaio na pergunta.

Deve-se notar que um ensaio pretendido para a medida de uma molécula em um tipo ou em um tecido particular da pilha é pouco susceptível de executar aceitàvel em amostras de outras fontes.

Outras moléculas além daquelas que competem directamente com o analyte do alvo podem ser um factor da interferência, tal como as proteínas obrigatórias da hormona, que obstruem ou removem o analyte da amostra. Outras moléculas podem alterar a conformação do analyte, mudar o modo obrigatório, ou causar outras transformações que impedem o funcionamento apropriado do ensaio.

Further Reading

Last Updated: Nov 1, 2018

Michael Greenwood

Written by

Michael Greenwood

Michael graduated from Manchester Metropolitan University with a B.Sc. in Chemistry in 2014, where he majored in organic, inorganic, physical and analytical chemistry. He is currently completing a Ph.D. on the design and production of gold nanoparticles able to act as multimodal anticancer agents, being both drug delivery platforms and radiation dose enhancers.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Greenwood, Michael. (2018, November 01). Factores de interferência no projecto do ensaio. News-Medical. Retrieved on May 29, 2020 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Interfering-Factors-in-Assay-Design.aspx.

  • MLA

    Greenwood, Michael. "Factores de interferência no projecto do ensaio". News-Medical. 29 May 2020. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Interfering-Factors-in-Assay-Design.aspx>.

  • Chicago

    Greenwood, Michael. "Factores de interferência no projecto do ensaio". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Interfering-Factors-in-Assay-Design.aspx. (accessed May 29, 2020).

  • Harvard

    Greenwood, Michael. 2018. Factores de interferência no projecto do ensaio. News-Medical, viewed 29 May 2020, https://www.news-medical.net/life-sciences/Interfering-Factors-in-Assay-Design.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News Medical.