Factores de interferencia en diseño del análisis

Hay varios factores que pueden afectar a la sensibilidad y a la confiabilidad de un análisis. Éstos deben ser considerados al seleccionar un sistema de la amplificación de la detección o de la señal.

Por los ambientes médicos de AlilaHaber de imagen: Ambientes médicos/Shutterstock de Alila

El alcance del análisis

Uno de los pasos más críticos del diseño del análisis es el ajustar de la sensibilidad. La concentración del analito del objetivo debe bajar dentro de un alcance de concentraciones donde está directamente proporcional la reacción del análisis a la concentración.

Encima o abajo de este alcance, los datos cuantitativos con respecto a la concentración de una molécula no se pueden deducir seguro, y así que la muestra requiere pasos de la concentración o de la dilución.

Fluorescencia

Una lectura fluorescente confía en la acción recíproca entre el analito del objetivo en una muestra y una molécula integrada en el análisis, que produce o previene la producción de luz de una longitud de onda y de una intensidad determinadas cuando está reunido. La presencia y la concentración de una molécula pueden ser determinadas vigilando estas acciones recíprocas.

Sin embargo, es importante asegurarse de que la muestra que se ensayará también no contiene otras moléculas capaces de obrar recíprocamente con el fluoróforo contenido dentro del análisis, con la excitación o el enfriamiento.

Esto es lo más común posible un problema cuando los lysates crudos de la célula, los homogenados del tejido, u otros especímenes biológicos sin procesar son el tema de la investigación. Puede también ser inducido por la selección pobre de componentes, tales como reductores o detersorios, como se utiliza en algunos análisis de la proteína.

En los análisis enzimáticos o celulares fluorogenic, usados para la investigación compuesta y perfilando propósitos, las composiciones tales como esto ellos mismos serían fluorescentes, así dando una señal del positivo falso, o visualice alternativamente la actividad inhibitoria donde existe ninguno real.

La interferencia fluorescente tal como esto se puede reducir usando los reporteros fluorescentes que excitan y emiten en longitudes de onda más largas que las moléculas encontradas en un entorno biológico.

Amplificación enzimática

La amplificación enzimática se utiliza con frecuencia al trabajar con las biomoléculas que son capaces del uno mismo-montaje de un patrón, tal como DNA o ARN. Esto perfecciona el tamaño de muestra masivo, teniendo en cuenta grandes aumentos en confiabilidad y sensibilidad, sin embargo, también aumenta la ocasión de introducir desvío exponencial en los resultados obtenidos.

La confianza que los análisis enzimático-acoplados no miden inadvertidamente una molécula con excepción del analito del objetivo es garantía esencial, pero posterior que el acoplar produce real la inhibición durante análisis de la investigación está apenas como importante.

Esto está porque las enzimas pueden entrar en el contacto para producir o para apagar fluorescencia, pero no no real permanente los pares de fuerzas, de tal modo produciendo un positivo falso. Los pasos tales como precipitación (inmuna) o purificación parcial deben ser considerados si las especies competentes se sospechan para estar presentes en una muestra.

Otros factores

El número y la variedad de factores que afectan a la exactitud y a la confiabilidad de análisis son totalmente relacionados en la muestra y el análisis en la pregunta.

Debe ser observado que un análisis previsto para la medición de una molécula en un tipo o un tejido determinado de la célula es poco probable de realizarse aceptable en muestras de otras fuentes.

Otras moléculas además de las que compitan directamente con el analito del objetivo pueden ser un factor de interferencia, tal como proteínas obligatorias de la hormona, que ciegan o quitan el analito de la muestra. Otras moléculas pueden alterar la conformación del analito, cambiar la manera obligatoria, o causar otras transformaciones que prevengan el funcionamiento apropiado del análisis.

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Last Updated: Nov 1, 2018

Michael Greenwood

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Michael Greenwood

Michael graduated from Manchester Metropolitan University with a B.Sc. in Chemistry in 2014, where he majored in organic, inorganic, physical and analytical chemistry. He is currently completing a Ph.D. on the design and production of gold nanoparticles able to act as multimodal anticancer agents, being both drug delivery platforms and radiation dose enhancers.

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