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LC-MS pour le dépistage et l'analyse de HCP

Les protéines de cellule hôte (HCP) sont des protéines recombinées qui sont exprimées par une cellule d'une substance différente, connues sous le nom de le « hôte ». Tandis que la présence de HCPs peut seulement être dans pièce-selon-million (ppm) des niveaux de concentration, elles sont hautement immunogènes et peuvent exercer des effets mortels sur des patients si elles ne sont pas retirées. la spectrométrie de masse de Liquide-chromatographie (LC-MS) est une méthode potentielle pour le dépistage de HCPs dans les produits biopharmaceutical.

Saut à :

la spectrométrie de masse de Liquide-chromatographie (LC-MS) est une méthode potentielle pour trouver HCPs dans les produits biopharmaceutical.Kateryna Kon | Shutterstock

Avantages de LC-MS pour le dépistage de HCP

LC-MS combine les capacités de deux méthodes : chromatographie liquide et spectrométrie de masse. La chromatographie liquide est employée pour séparer différents mélanges, alors que la spectrométrie de masse recense par la suite les molécules séparées. Ceci a plusieurs avantages. Premièrement, il permet à des scientifiques de recenser toutes les protéines dans un échantillon, y compris tels qui sont non-immunoréactif. Deuxièmement, il n'exige pas des anticorps de protéine-détail.

LC-MS a une sensibilité élevée, peut trouver des impuretés dans les parties selon million de gamme, et peut fournir des informations qualitativement et quantitativement. Cette méthode peut être exécutée avec unidimensionnel ou le bi-dimensionnel LC-MS.

Méthodologie

Premièrement, tous les peptides dans un échantillon doivent être extraits, purifiés, et fractionnés. L'échantillon est alors soumis à la chromatographie liquide unidimensionnelle ou bidimensionnelle suivie d'analyse spectroscopique de masse. Les résultats sont écrits dans une base de données qui contient des résultats pour des milliers de protéines potentielles de cellule hôte.

Concentrations inférieures

Quand les protéines de cellule hôte sont présentes aux concentrations très faibles, elles peuvent Co-s'éluer ou précipiter avec des peptides forts d'anticorps. En pareil cas, une dynamique plus grande peut être employée, avec une phase différente de séparation. Les listes variées d'exclusion et d'inclusion peuvent davantage améliorer la sensibilité de LC-MS.

Modes de la chromatographie de masse

Il y a plusieurs modes qui peuvent être employés pour le dépistage de la spectrométrie de masse :

  • Dans la méthode de fusil de chasse, le dépistage et la fragmentation des ions de peptide sont basés sur l'intensité de signe.
  • Dans la méthode « visée », un ensemble d'ions prédéterminés d'éclat sont trouvés des ions de précurseur qui sont alors anticipés dans l'échographie d'étude.
  • Les méthodes « dirigées » se rapportent au choix et à la fragmentation des ions de peptide qui sont prédéterminés dans l'échographie d'étude.

Une étude a prouvé qu'une méthode de combinaison concernant la spectroscopie de masse dirigée avec des méthodes bidimensionnelles de fractionnement pouvait recenser le numéro le plus élevé de HCPs.

Approches alternatives pour le dépistage de HCPs

Les méthodes actuel employées pour trouver HCPs pour comprendre ELISA (méthode ELISA) et éponger occidental. Cependant, ces méthodes exigent l'information préalable au sujet de HCPs, qui n'est pas requi pour LC-MS. En outre, ces méthodes sont intensif de temps et chères, et dans de nombreux cas, elles doivent être adaptées ont basé sur le type de cellules et la méthode de purification. De plus, l'ELISA ne trouve pas HCPs qui sont non-immunoréactif.

Une autre méthode est électrophorèse en gel bidimensionnelle. Cette méthode peut être accouplée à la microscopie à fluorescence et être employée d'une façon semi-quantitative. Cependant, cette méthode a une gamme limitée et exige de la présence d'autres méthodes de recenser le HCP.

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Last Updated: May 2, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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