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LC-MS para la detección y el análisis de HCP

Las proteínas de la célula huesped (HCP) son las proteínas recombinantes que son expresadas por una célula de una diversa especie, sabidas pues el “ordenador principal”. Mientras que la presencia de HCPs puede solamente estar en pieza-por-millón (ppm) niveles de concentración, son altamente inmunogenéticas y pueden tener efectos mortíferos sobre pacientes si no se quitan. la espectrometría de masa de la Líquido-cromatografía (LC-MS) es un método potencial para la detección de HCPs en productos biopharmaceutical.

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la espectrometría de masa de la Líquido-cromatografía (LC-MS) es un método potencial para descubrir HCPs en productos biopharmaceutical.Kateryna Kon | Shutterstock

Ventajas de LC-MS para la detección de HCP

LC-MS combina las capacidades de dos métodos: cromatografía líquida y espectrometría de masa. La cromatografía líquida se utiliza para separar diversas mezclas, mientras que la espectrometría de masa determina posteriormente las moléculas separadas. Esto tiene varias ventajas. En primer lugar, permite a científicos determinar todas las proteínas en una muestra, incluyendo los que sean no-immunoreactive. En segundo lugar, no requiere los anticuerpos proteína-específicos.

LC-MS tiene una alta sensibilidad, puede descubrir impurezas dentro de las partes por millón de alcances, y puede ofrecer la información cualitativo y cuantitativo. Este método se puede realizar con LC-MS unidimensional o bidimensional.

Metodología

En primer lugar, todos los péptidos dentro de una muestra deben ser extraídos, ser purificados, y ser fraccionados. La muestra entonces se sujeta a la cromatografía líquida unidimensional o bidimensional seguida por análisis espectroscópico en masa. Los resultados se incorporan en una base de datos que contenga los resultados para los millares de proteínas potenciales de la célula huesped.

Concentraciones inferiores

Cuando las proteínas de la célula huesped están presentes en los niveles muy bajos, pueden co-enjuagarse o precipitarse con los péptidos intensos del anticuerpo. En estos casos, un rango dinámico más amplio se puede utilizar, con una diversa fase de la separación. Los diversos filetes de la exclusión y de la partícula extraña pueden aumentar más lejos la sensibilidad de LC-MS.

Maneras de la cromatografía en masa

Hay varias maneras que se pueden utilizar para la detección de la espectrometría de masa:

  • En el método de la escopeta, la detección y la fragmentación de los iones del péptido se basan en la intensidad de la señal.
  • En el método “apuntado”, un equipo de iones predeterminados del fragmento se descubre de los iones del precursor que entonces se anticipan en la exploración del levantamiento topográfico.
  • Los métodos “dirigidos” refieren a la selección y a la fragmentación de los iones del péptido que se predeterminan en la exploración del levantamiento topográfico.

Un estudio mostró que un método de la combinación que implicaba la espectroscopia en masa dirigida junto con métodos bidimensionales del fraccionamiento podía determinar el número más elevado de HCPs.

Métodos alternativos para la detección de HCPs

Los métodos usados actualmente para descubrir HCPs para incluir ELISA (análisis Enzima-conectado del inmunosorbente) y borrar occidental. Sin embargo, estos métodos requieren la información anterior sobre HCPs, que no es requi para LC-MS. También, estos métodos son tiempo intensivo y costoso, y en muchos casos, necesitan ser adaptados basaron en el tipo de la célula y el método de la purificación. Además, ELISA no descubre HCPs que es no-immunoreactive.

Otro método es electroforesis bidimensional del gel. Este método se puede acoplar a la microscopia de fluorescencia y utilizar de una manera semiquantitativa. Sin embargo, este método tiene un alcance limitado y requiere la presencia de otros métodos determinar el HCP.

Fuentes

Further Reading

Last Updated: May 2, 2019

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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