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Perfilado de MicroRNA

Perfilado de MicroRNA

MicroRNAs, o los miRNAs, es pequeño RNAs que regulan la expresión génica después de que haya ocurrido la transcripción. Esto ocurre en estados fisiológicos sanos y estados enfermos en muchos organismos. Debido al alcance de procesos que ayudan a regular, los miRNAs puede ofrecer biomarkers valiosos en contextos de la enfermedad; esta es la razón por la cual el perfilado de la expresión del miRNA es un campo del estudio cada vez mayor.

El miRNA de Interestin

los miRNAs son cortos, los fragmentos del ARN de la no-codificación que ayudan a regular la expresión génica. Después de la transcripción de la DNA original, se libera el ARN de mensajero (mRNA) y el miRNA puede atar a él. Este atascamiento asciende la degradación del mRNA o de la inhibición de la traslación, de tal modo obstaculizando la formación de proteínas. Los miRNAs son poco numerosos comparados a los objetivos del mRNA, con áspero 1 miRNA para cada 30 mRNA. Sin embargo, estos pocos miRNAs pueden regular muchos mRNAs y por lo tanto para tener un efecto profundo sobre la expresión.

Dado que un miRNA puede potencialmente regular centenares de mRNA, se ha deducido que la configuración de la expresión de esos centenares de mRNA se puede capturar en un único miRNA. Esta riqueza de la información biológica está apelando a los investigadores en campos tales como biología, diferenciación del tejido, y enfermedad de desarrollo. el perfilado del miRNA implica el análisis de la expresión de los miRNAs que colocan de especie llano a grupos más pequeños de interés biológico.

Usos del perfilado

el miRNA puede regular que los mRNAs consiguen traducidos a las proteínas, y por lo tanto puede suprimir la expresión génica inadecuada. En biología de desarrollo, la comparación de los perfiles del miRNA puede ayudar a mostrar qué miRNAs están implicados en ciertos procesos de desarrollo. Tal investigación ha mostrado que repite los perfiles del miRNA, o la expresión, puede ser específica a ciertos tipos de la célula. Además, los miRNAs pueden parar transiciones de desarrollo y ayudar a mantener el estado de la célula una vez que ha distinguido. Esto ha llevado a investigadores a creer que el miRNA puede tener usos valiosos en células madres de comprensión.

En contextos de la enfermedad, los miRNAs se están explorando como fuentes de los biomarkers de ciertas enfermedades. los perfiles del miRNA de tejidos sanos y enfermos se comparan para determinar los biomarkers de la enfermedad y los objetivos terapéuticos potenciales. Esta táctica se ha empleado en las enfermedades del cáncer, autoinmunes, y neurológicas.

Particularmente, los miRNAs anormales consisten de interés terapéutico y en estudiar la progresión del tumor en cáncer. La causa subyacente para las diferencias en la expresión del miRNA entre los tejidos sanos y enfermos puede ser debido a las mutaciones de punto de la DNA, a la variación epigenética, o a los cambios cromosómicos a los genes del miRNA. En cáncer, el perfilado del miRNA también se ha utilizado para diagnosticar clínico el origen del cáncer cuando la otra identificación es difícil. el miRNA incluso se ha empleado en la medecina legal por razones similares, pues los perfiles del miRNA pueden ayudar a distinguir los tipos de fluído corporal encontrados en escenas del crimen.

Métodos de perfilado del miRNA

el perfilado del miRNA se puede hacer usando un alcance de métodos, tales como reacción en cadena reversa cuantitativa de polimerasa de la transcripción (qRT-POLIMERIZACIÓN EN CADENA), microarray del miRNA, y secuencia del ARN. QRT-POLIMERIZACIÓN EN CADENA implica la transcripción reversa del miRNA en cDNA, y la secuencia subsiguiente del producto.

Este método se aplica común al otro estudio genético y por lo tanto está apelando a los laboratorios ya familiares con el método. Para perfilar el miRNA usando qRT-POLIMERIZACIÓN EN CADENA, varios miRNAs se analizan paralelamente bajo mismas condiciones de la reacción. Sin embargo, los miRNAs pueden diferir drástico en sus condiciones óptimas que los medios que analizan miRNAs paralelamente puedan ser difíciles. Para vencer esto, los investigadores pueden utilizar los ácidos nucléicos bloqueados (LNAs) en las pinturas de fondo ellos mismos.

Los Microarrays también analizan varios miRNAs paralelamente durante el perfilado. En el microarray, los miRNAs fluorescente se marcan con etiqueta. las antenas DNA-basadas de la captura entonces se utilizan para cruzar el miRNA por hibridación marcado con etiqueta. Estas antenas pueden o no pueden contener LNAs, apenas como en qRT-POLIMERIZACIÓN EN CADENA. El arsenal entonces se explora, y la fluorescencia se cuantifica para perfilar el miRNA. Los Microarrays permiten que muchas más muestras sean perfiladas en tándem, no obstante este método es generalmente más costoso.

Un más nuevo enfoque al perfilado del miRNA es secuencia de la siguiente-generación. El ARN que ordena (ARN-seq) es un tal método y a menudo se considera la nueva técnica más potente para el perfilado del miRNA. Como qRT-POLIMERIZACIÓN EN CADENA, en ARN-seq la muestra experimenta la transcripción reversa para generar una biblioteca del cDNA. Los adaptadores se insertan conectado a los extremos de los cabos del cDNA y las muestras se amplifican usando la polimerización en cadena. Los datos sin procesar de la serie se analizan usando la bioinformática para revelar miRNAs sabidos. La predicción de nuevos miRNAs es también posible.

Fuentes

  1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4517822/
  2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29380324
  3. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0959437X13000129

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Last Updated: Feb 26, 2019

Sara Ryding

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Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

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